基因合成/DNA提取纯化/QPCR/ChIP服务

基因合成

实验室通常用PCR和RT－PCR的方法来获取某个基因片段，但是往往因为标本和模板等原因无法钓取该段基因。如今，我们采用化学合成的方法人工构建基因片段，即：全基因合成拼接技术。可以为广大的科研朋友服务。

基因合成是指在体外合成双链DNA分子的一门技术,与寡核苷酸合成有所不同，寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。可根据客户需求，我中心可以提供全基因合成服务，速度快、周期短、价格优惠。合成的基因可以根据客户的需求连接到不同的载体上，最终提供的产品包括菌株以及冻干的质粒和全基因完整的测序报告。

全基因合成的适用范围：

A: 自然界中无法以常规实验手段得到的基因

B:研究人员通过自己的意愿设计基因序列,以得到自然界中不存在的基因

C:对已知基因序列进行大量密码子优化重排,以期达到对该基因进行高效表达或获得新的生物特性等研究目的

服务优势：

A:合成基因最长已达到10.5KB,已完成基因超过10000条
B:可以合成重复序列(重复次数无限制).高GC(小于80%).发夹(参照每200bp小于3个发夹为限).连续单一碱基重复(GC小于15个,AT小于20个)等富含特殊结构的基因
注:特殊结构基因合成的相关数据是根据我公司曾经成功合成过的基因序列所做的总结,以作为您设计基因序列时判断是否能顺利合成作为参考,具体还需以实际基因序列来定
C:基因可以克隆到客户提供或指定的表达载体上
D:免费提供基因结构设计.基因密码子优化,基因克隆表达方案设计等基因合成相关咨询服务.

全基因合成操作程序：

1、我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列，然后根据序列的具体情况设计合成方案。

2、在得到您认可后，我们将立即进行单链Oligo DNA 合成，DNA片段拼接等工作。然后把全长基因克隆到载体中，再通过DNA测序确认合成基因的正确性。

3、测序结果如果发现有错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。

服务要求：

• 请您以EMAIL的形式提供需要合成的基因的序列。

• 请您说明实验的具体要求：如：使用何种酶切位点，进行克隆，以及需要克隆到何种载体等。

• 本中心将免费提供PUC57－T载体，如果需要装在其它载体中，请客户自已提供。

结果提供：

A: 基因合成报告单一份
B: 含目的基因的质粒(不少于1ug)一份
C: 含目的基因的菌株一份
D：基因合成的测序图谱一份

QPCR检测

逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

操作步骤：
1、RNA提取并除去RNA中的基因组DNA污染
2、第一链cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物进行PCR反应
4、琼脂糖上进行凝胶电泳
5、成像分析软件Quantity One进行半定量
PCR条件的优化：
PCR条件的优化主要是①引物退火温度的调节，一般在引物设计软件推荐温度的上下2 ℃变化寻找最佳退火温度。②此外Mg2＋浓度的调节也非常重要，通常最佳浓度为2mM左右。③引物和模板的量等。 
实验要求：
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样本）。如是如织：100－200mg
2、请通过EMAIL提供已知的全长基因序列。
3、请提供详细背景资料：DNA/RNA来源，丰度。
4、在实验前请您要确保目的基因可以表达，并确保您提供的实验信息的准确性。
服务承诺：
1.本公司会在最短的时间内快速将实验完成。    
2.本公司保证检测结果准确、客观、可信。
3. 本公司保证不对外公开或不向第三方提供客户相关信息。
结果提供：
1、实验详细步骤，和相关数据。
2、完整的实验报告实验图片（含软件分析结果）

ChIP服务

染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。ChIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，是深入分析癌症、心血管疾病以及中央神经系统紊乱等疾病的主要通路的一种非常有效的工具。

操作流程：

1.甲醛处理细胞固定
2.收集细胞，超声破碎，凝胶电泳检测超声片段大小，估计样本DNA浓度。
3.加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合
4.加入ProteinA/proteinG琼脂珠或磁珠，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，IP反应
5.对沉淀下来的复合物进行清洗，除去非特异性结合
6.洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物
7.解交联，纯化富集的DNA-片断
8.对富集得到的DNA片段进行QPCR反应

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