细胞凋亡检测南京欧际医药科技服务有限公司

技术服务信息

服务名称:细胞凋亡检测
服务类别:分子生物学服务 - 分子生物学整体服务
价格:200元
允许参观:允许参与实验
所在区域:江苏.南京
更新时间:2016-12-1 11:30:00
浏览人数:66
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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南京欧际医药科技服务有限公司
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鲁文娜
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技术服务详细描述

通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。
将Annexin V 进行荧光素标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。***化丙***(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

服务流程
1、细胞固定
2、配置染色液
3、细胞染色
4、上机检测
5、结果分析


客户提供
培养好的细胞(大于106)。
交付内容
实验报告:详细操作步骤、流式上机图片及统计分析结果。

服务列表

项目说明周期
细胞周期流式检测PI染色5个工作日
细胞凋亡流式检测Annexin V与PI标记5个工作日
 
 
CCK-8检测 
Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒基于2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐试剂,可对细胞增殖和细胞毒性进行快速高度灵敏的检测。
2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐是一种类似于MTT的化合物,其在电子耦合试剂1-Methoxy-PMS存在的情况下,可以被活细胞线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色水溶性的Formazan。然后用酶标仪在450 nm波长附近(430~490nm)测定光吸收值,可反映活细胞的数量和代谢活力,并由此反映细胞的存活、增殖、生长和毒性等状态。例如加入细胞生长因子后,增殖生长旺盛的细胞能够还原生成更多的Formazan,并具有较高的光吸收度;反之,抗增殖抗肿瘤或细胞毒药物处理后,细胞生长变慢或毒性变大,光吸收度下降。而对于同种类型的细胞而言,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。与传统的MTT或其他类似的方法相比,本试剂盒生成的Formazan是水溶性的,而且更加稳定,其检测的线性范围更宽、灵敏度也更高。
  
Tunel细胞凋亡检测
显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品,经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤,即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
    细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP),随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合,最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞,这就是本试剂盒通过TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
    本试剂盒有如下优点    (1)高灵敏度:可以在单细胞水平检测到细胞凋亡,同时由于凋亡早期就有DNA断裂,可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性好:TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞,而不容易标记坏死细胞。(3)快速:仅需约2-3个小时即可完成。(4)应用范围广:可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
    TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
    极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。
    本试剂盒足够检测20个样品。
 
 
 
细胞生物学:细胞原代培养和传代培养实验技术服务

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