DNA的提取原理及提取技术上海延慕实业有限公司

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技术服务信息

服务名称:DNA的提取原理及提取技术
服务类别:分子生物学服务 - DNA提取/纯化
价格:询价
允许参观:不允许参观
所在区域:上海.上海
更新时间:2016-12-7 8:34:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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技术服务详细描述

DNA的提取原理及提取技术
天然DNA的来源:
1 染色体DNA
  原核生物和真核生物均含有染色体DNA,它是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料。
2 病毒和噬菌体DNA 
  主要用于构建基因克隆载体,也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料。
质粒DNA 
3多微生物(大肠杆菌、农杆菌和蓝细菌)都含有质粒DNA,主要用于构建基因克隆载体,也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料。
4 线粒体和叶绿体DNA
这是真核生物特有的染色体外遗传物质,分别含有与呼吸作用和光和作用相关的基因。主要用于分离目的基因。

植物细胞的化学成分主要有:
1 水、糖类、蛋白质、脂肪以及核酸是生物体所需的基本成分;
2 氨基酸是合成蛋白质的基本原料;
3 果胶、纤维素、半纤维素是植物细胞壁的组成成分;
4 淀粉是光合作用的产物;
5 金属离子主要用来调节细胞的渗透平衡等,比如钾和钠,镁和***是叶绿素的成分。

植物总DNA提取原则
保证DNA结构的完整性  
排除有机溶剂和金属离子的污染
蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度
排除其他核酸分子的污染

植物DNA提取的基本原理
DNA特点:
   DNA是极性化合物,溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。
   在酸性溶液中,DNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。
   DNP在盐溶液中的溶解度随着盐浓度的增加而增加。
植物DNA提取的基本原理
DNA提取基本步骤:
1 细胞裂解和DNA的溶解
   主要任务:破碎细胞并对DNA实施保护。
   采取措施:
    ⑴利用液氮研磨,使酶失活;
    ⑵快速加入缓冲液并迅速混匀,对细胞溶浆中DNA进行保护。
EDTA—螯合DNA酶的辅助因子Mg2+和Ca2+,使DNA酶活性降低;
  SDS—使蛋白质变性并降解蛋白质,也可降低DNA酶的活性;
  抗氧化剂—降低酚类氧化对DNA的干扰;
   PVP—与多酚形成复杂的聚合体,与多糖结合,有效去除多糖;
植物DNA提取的基本原理


2  与核酸结合的蛋白质及RNA等杂质的去除;
   主要利用DNA与蛋白质、多糖等在生化性质上的差别,通过加入离子变性剂,去污剂使蛋白质或多糖变性,核蛋白解聚。
   CTAB
   SDS
除蛋白质
氯仿/异戊醇抽提(氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离;异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡)。
使用变性剂变性 (SDS、异硫***酸胍等)
高盐洗涤(当溶液中的中性盐的浓度大于1mol/L 时,蛋白质会沉淀析出 .)
蛋白酶处理

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