TALENs或CRISPR-Cas9基因打靶小鼠仁源生物技术(上海)有限公司

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技术服务信息

服务名称:TALENs或CRISPR-Cas9基因打靶小鼠
服务类别:实验动物服务 - 转基因动物定制服务
价格:1元
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2016-12-7 17:39:00
浏览人数:115
诚信指数:56点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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仁源生物技术(上海)有限公司
地址:
上海市闵行区江月路1059号
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021-34781526
传真:
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联系人:
吕磊
所在区域:
上海·上海
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技术服务详细描述

利用TALEN技术或CRISPR-Cas9技术制备“基因打靶”小鼠:
近年来基于核酸酶的DNA剪切技术(如TALENs技术与CRISPR-Cas9技术)的发展,为制备基因敲除小鼠模型提供了一种简单、快速的技术手段。TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)技术依靠特定的蛋白模块识别并结合目标区域(一般位于基因的外显子中)上下游特定的DNA序列,并依靠FokI核酸酶对DNA进行剪切,通过非同源末端结合(Non-Homologous End Joining,NHEJ),造成移码突变(Frame Shift),实现“基因敲除”。此外,在供体质粒或者Oligo存在的情况下,通过同源介导修复(Homology Directed Repair,HDR), 可以实现定点的“基因敲入”。类似地,CRISPR-Cas9技术利用一个可以识别并结合目标区域的Guide RNA(gRNA)序列,以及一个具有核酸酶活性的Cas9蛋白,实现对目标区域的定点剪切,通过NHEJ或者HDR的方式,实现“基因敲除”或“基因敲入”。
为确保效率,我们一般会针对目的基因,设计多对TALEN Pairs或者多条gRNAs。首先在细胞系中验证其打靶的效率,然后挑选效率最高的1~2组TALEN Pairs或gRNAs,进行原核显微注射,以高效获得“基因敲除”小鼠。通过TALEN技术与CRISPR-Cas9技术获得的Founder小鼠,还需对其子代小鼠进行基因型鉴定后方能进行取舍,这一点类似于转基因小鼠。 
目前TALEN技术与CRISPR-Cas9技术尚不能完全取代经典的通过小鼠ES细胞的方法制备“基因打靶”小鼠,在制备 “条件型基因敲除”小鼠(需在不同的位置插入两个LoxP位点)或“染色体工程”小鼠等需要复杂遗传操作的小鼠模型时,经典的通过小鼠ES细胞的制备方法依然具有优势。

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