过表达细胞系服务北京安必奇生物科技有限公司

技术服务详细描述

 安必奇的专家们有多年丰富的经验可以在各种细胞类型上实现基因的过表达，甚至是难转染的细胞。我们提供的过表达稳定细胞系有GPCR、Reporter和离子通道稳定细胞系等，此外我们还可以根据客户的需要进行量身定做，在各种哺乳动物细胞中过表达各种基因
技术流程

• 载体构建- 将目的基因克隆入高效表达载体中。
• 转染或转导- 通过电转染、转染试剂（脂质体等）或病毒包装的方法将外源基因转染或转导入细胞。
• 筛选- 根据表达载体的筛选标记，优化最佳筛选药物浓度，进行阳性细胞克隆筛选，如嘌呤霉素、G418筛选等。
• 扩大培养- 挑取单克隆细胞，进行扩大培养。
• 目的基因表达检测- 通过PCR、qRT-PCR、Westernblot等方法，从DNA、mRNA、蛋白水平进行目的基因的表达检测。
• 稳定性验证- 所有过表达细胞系都经过了严格的测试和验证，其稳定性能保持25代以上，且保证均无支原体污染。
• 功能性验证- 对外源基因表达蛋白进行功能性检测。GPCR过表达细胞株一般采用报告基因方法和（或）胞内钙流检测方法进行活性测定。对于离子通道过表达细胞株，我们可应用膜电位染料、手动膜片钳或Qpatch的方法进行测定。