蛋白N端,C端测序北京安必奇生物科技有限公司

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技术服务信息

服务名称:蛋白N端,C端测序
服务类别:蛋白相关服务 - 氨基酸分析服务
价格:询价
允许参观:协商决定
所在区域:北京.北京
更新时间:2017-1-16 17:14:00
浏览人数:45
诚信指数:548点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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技术服务详细描述

 

蛋白测序服务

技术原理

蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,Edman化学降解,其基本原理是包括通过异硫***酸***脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,***氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤******氨(ATZ)转化为***异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解,最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。

Edman 测序示意图

尽管Edman法技术已近乎完善,但仍有不尽人意之处,例如Edman降解法不能解决N端封闭的测序问题(环化、封闭)、被修饰的蛋白不能给出确切的信号,要求蛋白或多肽的纯度在95%以上,灵敏度较低。质谱法不受N末端封闭的限制,能对侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位,灵敏度很高,因而具有其独特优势,与传统的Edman降解法相互补。

质谱测序

蛋白质的C末端分析,并不能采取类似N端氨基酸序列分析的化学分析。无论是国内要求,还是国外药典,现阶段都是采取质谱法对蛋白质样品的C末端序列分析。其原理为利用蛋白质在质谱中会有规律的破碎,获得蛋白质肽段的碎片,分析图谱得到蛋白质的C-端序列。

样品要求:

  • 蛋白质样品可以是干粉、溶液或固定在PVDF膜上(转膜的蛋白质分子量最好不超过20KD,最好用丽春红染色);
  • 样品浓度及纯度:浓度>50pmo l,纯度>90% (建议提供的样品量为所需量的5倍以上);
  • 含盐量:不挥发无机盐<5mM ,挥发性无机盐<20mM ,不能使用Tris 缓冲体系

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