蛋白N端,C端测序-蛋白相关服务 -技术服务-生物在线
蛋白N端,C端测序

蛋白N端,C端测序

商家询价

产品名称: 蛋白N端,C端测序

英文名称: Protein sequencing

产品编号:

产品价格: 询价

产品产地: null

品牌商标: null

更新时间: 2023-09-21T16:17:05

使用范围: null

北京安必奇生物科技有限公司
  • 联系人 :
  • 地址 : 北京市通州区经海五路1号院22号楼
  • 邮编 :
  • 所在区域 : 北京
  • 电话 : 158****7462
  • 传真 :
  • 邮箱 : info@abace-biology.com

 

蛋白测序服务

技术原理

蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,Edman化学降解,其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解,最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。

Edman 测序示意图

尽管Edman法技术已近乎完善,但仍有不尽人意之处,例如Edman降解法不能解决N端封闭的测序问题(环化、封闭)、被修饰的蛋白不能给出确切的信号,要求蛋白或多肽的纯度在95%以上,灵敏度较低。质谱法不受N末端封闭的限制,能对侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位,灵敏度很高,因而具有其独特优势,与传统的Edman降解法相互补。

质谱测序

蛋白质的C末端分析,并不能采取类似N端氨基酸序列分析的化学分析。无论是国内要求,还是国外药典,现阶段都是采取质谱法对蛋白质样品的C末端序列分析。其原理为利用蛋白质在质谱中会有规律的破碎,获得蛋白质肽段的碎片,分析图谱得到蛋白质的C-端序列。

样品要求:

  • 蛋白质样品可以是干粉、溶液或固定在PVDF膜上(转膜的蛋白质分子量最好不超过20KD,最好用丽春红染色);
  • 样品浓度及纯度:浓度>50pmo l,纯度>90% (建议提供的样品量为所需量的5倍以上);
  • 含盐量:不挥发无机盐<5mM ,挥发性无机盐<20mM ,不能使用Tris 缓冲体系