蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定北京科点科技有限公司

技术服务信息

服务名称:蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定
服务类别:蛋白相关服务 - 蛋白分析服务
价格:1500元/样
允许参观:允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2016-12-14 14:15:00
浏览人数:70
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京科点科技有限公司
地址:
北京市昌平区东小口卢卡新天地2号楼1101
邮编:
电话:
010-53369176
传真:
010-53801690
联系人:
孙立梅
所在区域:
北京·北京
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

 

蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定

 

单一蛋白质或者蛋白混合物的鉴定是生物学研究中经常遇到的问题,易科学采用Thermo Fisher最新推出的Q Exactive质谱系统,LTQ Orbitrap Velos质谱系统,结合UPLC,利用液质联用的方法,为广大科研工作者提供蛋白鉴定服务。与传统的蛋白质鉴定中经常用到的MALDI-TOF质谱系统相比,LC-MS/MS方法灵敏度更高、鉴定到的蛋白肽段覆盖率更好、结果更加可信。对于单一蛋白质和简单蛋白混合物的鉴定。

 

可以进行以下样品的鉴定:

1. 1D-SDS PAGE胶条中蛋白的鉴定;

2. 2DE PAGE中蛋白胶点的鉴定;

3. 蛋白表达产物的验证;

4. 免疫共沉淀(Co-IP)样品中蛋白的鉴定;

实验原理

蛋白质鉴定的原理是基于鸟枪法(Shot-gun),将蛋白条带或者蛋白溶液酶切成肽段混合物,经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分,进入高分辨率质谱仪中进行分析。检索软件根据二级质谱信息与相应的数据库比对,结合匹配度打分及错配过滤,可得到肽段的确切序列,进而拼接出各蛋白的完整序列,从而实现对蛋白的鉴定。

研究路线

基于鸟枪法(shot-gunLC-MS的蛋白鉴定流程

 


 

蛋白质鉴定试验中样品的前处理过程严格按照Nature Methods发表的文章:Universal sample preparation method for proteome analysis进行,保证鉴定试验中得到更高的肽段覆盖率。

 

样品要求

 液体样品(In solution format

1. 假如样品中蛋白量>10ug,我们对样品的缓冲体系没有要求;

2. 假如样品中蛋白量<10ug,样品准备过程中尽量减少SDS等表面活性剂的使用,并注意降低盐浓度;

1D SDS PAGE /2D PAGE gels样品

1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby 以及Silver stain样品均可进行蛋白的鉴定试验;

2. 银染的样品有可能与后续的质谱分析不兼容,我们推荐您使用下面的产品或者实验步骤进行银染实验:

ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)

Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)

3. 银染的样品请不要进行脱色处理

3. 提交样品过程中,注意提供样品的缓冲体系和样品中蛋白的预估含量;

Co-IP样品

1. 如果您洗脱的样品需要跑胶,请按照1D SDS PAGE样品准备要求准备样品即可;

2. 如果您直接提交洗脱样品,我们推荐使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 缓冲体系进行最后一步蛋白的洗脱,保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容;

样品运输

我们推荐您将样品冻干后进行运输,冻干样品中蛋白非常稳定;

液体样品推荐干冰运输,短途运输冰袋也可以;

注意:

利用质谱进行蛋白样品的鉴定,在样品准备过程中需佩戴手套和头套,尽量避免自身角蛋白(keratin)对样品的污染。

 

服务周期及报价

服务周期:5-10个工作日

报价:1,500/样品

 结果展示

项目完成之后,我们会提供英文版的技术报告。报告中我们会提供详细的实验步骤、相关的质谱参数和鉴定物质的信息,鉴定到的蛋白会以Excel表格的形式给出,如果需要质谱原始数据会以DVD光盘的形式寄送给您。案例如图所示:

 


 

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