蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定

单一蛋白质或者蛋白混合物的鉴定是生物学研究中经常遇到的问题，易科学采用Thermo Fisher最新推出的Q Exactive质谱系统，LTQ Orbitrap Velos质谱系统，结合UPLC，利用液质联用的方法，为广大科研工作者提供蛋白鉴定服务。与传统的蛋白质鉴定中经常用到的MALDI-TOF质谱系统相比，LC-MS/MS方法灵敏度更高、鉴定到的蛋白肽段覆盖率更好、结果更加可信。对于单一蛋白质和简单蛋白混合物的鉴定。

可以进行以下样品的鉴定：

1. 1D-SDS PAGE胶条中蛋白的鉴定；

2. 2DE PAGE中蛋白胶点的鉴定；

3. 蛋白表达产物的验证；

4. 免疫共沉淀（Co-IP）样品中蛋白的鉴定；

实验原理

蛋白质鉴定的原理是基于鸟枪法（Shot-gun），将蛋白条带或者蛋白溶液酶切成肽段混合物，经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分，进入高分辨率质谱仪中进行分析。检索软件根据二级质谱信息与相应的数据库比对，结合匹配度打分及错配过滤，可得到肽段的确切序列，进而拼接出各蛋白的完整序列，从而实现对蛋白的鉴定。

研究路线

基于鸟枪法（shot-gun）LC-MS的蛋白鉴定流程

蛋白质鉴定试验中样品的前处理过程严格按照Nature Methods发表的文章：Universal sample preparation method for proteome analysis进行，保证鉴定试验中得到更高的肽段覆盖率。

样品要求

 液体样品（In solution format）

1. 假如样品中蛋白量＞10ug，我们对样品的缓冲体系没有要求；

2. 假如样品中蛋白量＜10ug，样品准备过程中尽量减少SDS等表面活性剂的使用，并注意降低盐浓度；

1D SDS PAGE /2D PAGE gels样品

1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby 以及Silver stain样品均可进行蛋白的鉴定试验；

2. 银染的样品有可能与后续的质谱分析不兼容，我们推荐您使用下面的产品或者实验步骤进行银染实验：

ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)

Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)

3. 银染的样品请不要进行脱色处理

3. 提交样品过程中，注意提供样品的缓冲体系和样品中蛋白的预估含量；

Co-IP样品

1. 如果您洗脱的样品需要跑胶，请按照1D SDS PAGE样品准备要求准备样品即可；

2. 如果您直接提交洗脱样品，我们推荐使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 缓冲体系进行最后一步蛋白的洗脱，保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容；

样品运输

我们推荐您将样品冻干后进行运输，冻干样品中蛋白非常稳定；

液体样品推荐干冰运输，短途运输冰袋也可以；

注意：

利用质谱进行蛋白样品的鉴定，在样品准备过程中需佩戴手套和头套，尽量避免自身角蛋白（keratin）对样品的污染。

服务周期及报价

服务周期：5-10个工作日

报价：￥1,500/样品

 结果展示

项目完成之后，我们会提供英文版的技术报告。报告中我们会提供详细的实验步骤、相关的质谱参数和鉴定物质的信息，鉴定到的蛋白会以Excel表格的形式给出，如果需要质谱原始数据会以DVD光盘的形式寄送给您。案例如图所示：