实时荧光定量PCR服务北京百民敬生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:实时荧光定量PCR服务
服务类别:分子生物学服务 - 实时定量PCR服务
价格:120元
允许参观:协商决定
所在区域:北京.海淀区
更新时间:2017-1-5 16:57:00
浏览人数:77
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京百民敬生物科技有限公司
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王宏业
所在区域:
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技术服务详细描述

服务名称: 实时荧光定量PCR服务
技术原理
Real-time PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
实时荧光定量PCR技术具有特异性强,有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点,做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定Ct值,从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量。
服务流程(含逆转录)
1、RNA的提取
2、DNase I 消化样品RNA 中的DNA
3、RNA琼脂糖凝胶电泳
4、RNA反转录为cDNA
5、引物设计合成、探针设计合成(探针法)
Real-Time PCR引物设计的要求
① Tm=55~65 oC
② GC=30~80%
③ PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80~300 bp之间都可。
④ 引物的退火温度要高,一般要在60oC以上。选择特异性好,扩增效率高的引物。

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