MTT-新药研发外包服务-技术服务-生物在线
MTT

MTT

商家询价

产品名称: MTT

英文名称: MTT

产品编号:

产品价格: 询价

产品产地: null

品牌商标: null

更新时间: null

使用范围: null

北京爱思益普生物科技股份有限公司
  • 联系人 :
  • 地址 : 北京市经济技术开发区科创十三街18号院16号楼
  • 邮编 : 100176
  • 所在区域 : 北京
  • 电话 : 185****7260
  • 传真 : 010-67809840
  • 邮箱 : caisw@ice-biosci.com

 MTT(四唑蓝)比色法是是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT法广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验等研究。

 

实验方法:

        1. 收集对数生长期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入50μl铺板使待测细胞调密度 5000- 7500细胞孔。

        2.  5%CO237℃孵育过夜,倒去培养液,加入浓度梯度的药物。每个药物设9个浓度梯度(30μmol/L,10μmol/L,3.33μmol/L,1.11μmol/L,0.37μmol/L,0.123μmol/L, 0.041μmol/L, 0.0137μmol/L, 0μmol/L),每孔50μl,每个浓度设2个重复,同时设DMSO和阳性药物(Taxol/Gemcitabine)对照组。

       3.  5%CO237℃孵育72小时。

       4. 倒掉含药培养基,每孔加入100μl 用无血清培养基配制的终浓度1mg/ml MTT 溶液,继续培养4h

       5.  每孔加入溶解液25%SDS (Sodium Dodecyl Sulfate十二烷基硫酸钠)+50%DMF 100μl37℃孵育过夜。

       6. synergy 4多功能读板机于OD570nm读取各孔的吸光值。

 

统计学分析

         1.分析软件     ExcelGraphPad Prism 5

        2.  数据分析    

 1)计数资料以均值±标准差表示,结果采用单因素方差分析(ANOVA)。

      2)各种样品的IC50曲线用GraphPad Prism 5软件进行分析生成。

            样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比为:

  (样品孔OD-空白孔OD均值)/(阴性对照孔OD-空白孔OD均值)*100%

  3)样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比进行非线性回归分析,按以下方程进行拟合,得到样品的浓度-效应依赖性曲线。

Y = 1/(1 + 10(log IC50 − X× HillSlope)

                    其中IC 50为抑制肿瘤生长50%的样品浓度。