“Knock-out First”“一鼠多用”基因敲除服务仁源生物技术(上海)有限公司

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技术服务信息

服务名称:“Knock-out First”“一鼠多用”基因敲除服务
服务类别:实验动物服务 - 转基因动物定制服务
价格:1元
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2017-3-30 11:14:00
浏览人数:32
诚信指数:60点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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技术服务详细描述

Knock-out First”是一种设计巧妙的基因打靶策略,它只需要构建一种特殊的基因打靶小鼠,就可以通过和不同的工具鼠交配,获得完全基因敲除的小鼠、条件性基因敲除的小鼠、带Reporter基因的基因敲除小鼠等三种类型,满足多方面研究基因功能和特性的需要。



具体策略如下:

首先,采用CGES技术,将“FRT-SA-EGFP-LoxP-NEO-FRT-LoxP”元件,以及第3个 “LoxP”元件,分别插入到一个内含子与下游的内含子中去。当获得基因打靶成功的小鼠后,

i)若直接与Cre小鼠交配,可以去除第1与第3LoxP位点间的序列,从而获得Reporter小鼠(目标基因会同时失活),即目标基因在何种组织与细胞中表达,细胞就会被EGFP荧光蛋白所标记(也可以根据一个需要替换成其它颜色荧光蛋白)

ii)若直接与全身性的Flp小鼠(如Actin-Flp小鼠)交配,可以去除第1与第2Frt位点间的序列(包含第1LoxP位点),从而获得条件型Flox小鼠;

 

iii)如果再将Flox小鼠与组织特异性的Cre小鼠交配,即可获得组织特异性的基因敲除小鼠。


 

Knock-out First” 服务流程和周期:(9-12个月)


A-B)通过“Knockout First”策略制备的嵌合小鼠,其毛色为棕色(Agouti)与奶油色(Cream)相间,含有较少或不含有黑色毛色;(C-D)上述嵌合小鼠与C57/BL6小鼠交配后获得的F1代小鼠,其毛色为棕色(Agouti,证明ES细胞已经整合入嵌合小鼠的生殖系,并且传递到F1代。

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