自杀质粒经酶切后与目的基因融合片段连接，连接产物转化大肠杆菌中间宿主菌，获得携带外源片段的自杀载体。载体电转化工程金黄色葡萄球菌，使自杀载体得到特异的甲基化修饰，提高后继电转化靶细菌的成功率。甲基化修饰载体电转化到靶细菌。由于自杀载体不能在非工程化的金黄色葡萄球菌中复制，在抗生素选择压力下，只有细菌基因组靶位点整合有自杀载体的插入突变株才可以存活。在第二轮反向选择压力下，只有细菌基因组发生第二次同源重组并丢失自杀质粒的细菌才可以存活，在第二组同源重组后，子代细菌产生靶基因的缺失突变株和野生型菌株，通过PCR对平板上的克隆筛选，再经过测序验证，即可获得目的基因缺失突变（或其它遗传改造）。

将携带有λ重组系统的质粒pKD46或pSIM5电转化入目标大肠杆菌中，获得可控表达重组系统的大肠杆菌株，再电转化入PCR产物，PCR产物二端为短的目的基因B两端序列相同的同源臂，中间为带有筛选标记的基因Y（通常为抗性基因）。PCR产物在pKD46或pSIM5表达的重组系统作用下，与基因X二端同源片段发生重组，目的基因B被Y替代，从而实现B基因的失活。

高温诱导下pKD46或pSIM5丢失，再次电转入pCP20质粒，诱导条件下表达FLP重组酶，基因Y两病的FRT位点发生重组，基因Y从染色体上切离，从而实现基因B的完全缺失。

（1）简单快速，不需要耗时长的自杀载体构建过程。

（2）一次导入表达重组系统的质粒后，可以重复使用，大量节约时间。

服务价格及周期

(1) 菌株抗性测试（Ampicillin、Tetracycline、Kanamycin、Chloramphenicol），递交菌株前进行抗性测试，将节约您宝贵的时间。

(2) 准确的菌株种属信息及确切的待敲除或修饰基因序列及基因邻近上下游500bp左右的序列（序列信息标注见范例）

(3) 纯化、没有污染且鉴定正确的菌株

(4) 采用密封的离心管或冻存管或培养平板常温运送（顺丰快递）

(5) 本系统默认的培养基为LB培养基，培养温度为37℃，如有特殊要求，请来样时注明。