赛业生物采用第3代重组慢病毒包装系统制备病毒颗粒。为了增加慢病毒的安全性能，病毒制备所必需的元件序列被拆分到4个质粒当中，分别是：
1）1个编码目的基因的慢病毒转移质粒。目的基因两侧各有一个LTR（long terminal repeat）序列，LTR序列促使目的基因整合到目的细胞基因组里。为了提高安全性能，转移质粒的3’ LTR缺失了部分序列，使得整合后的病毒基因组失去自我复制能力。
2）2个包装质粒。其中一个质粒编码Rev, 另外一个质粒编码Gag和Pol。
3）1个编码包膜蛋白的质粒。

利用上述质粒包装出来的重组慢病毒颗粒，被称为自我失活VSV-G假型慢病毒（self-inactivating VSV-G pseudotyped lentivirus）。

慢病毒包装

生产携带目的基因的重组慢病毒颗粒，过程如下图：

首先将转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒转染到293T细胞。更换新鲜的培养基后，继续培养48～72小时。收集培养液，进行离心浓缩后，就可得到转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的超纯病毒颗粒，可以利用蔗糖超速离心进一步去除杂质，从而获得纯度更高的病毒颗粒。    

质量控制

我们会对每一批病毒都进行滴度检测，严格控制质量，让你百分百放心。针对用携带荧光报告基因的转移质粒生产的病毒，我们会先用荧光法检测病毒的转导率，如能达到使用要求，再进一步采用qPCR法检测病毒滴度。

服务明细

赛业生物不仅仅提供基因表达慢病毒定制服务，还提供shRNA干扰慢病毒和gRNA慢病毒定制服务。您可根据实验需要，选择一款适合于您的重组慢病毒来开展基因功能研究工作。

CRISPR/ Cas9基因敲除慢病毒载体

CRISPR基因敲除慢病毒系统包括两个载体：

1）gRNA慢病毒载体

gRNA慢病毒载体由慢病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUC ori。慢病毒基因组序列是从元件5’LTR开始，到3’LTR结束。

2）Cas9慢病毒载体

Cas9慢病毒载体利用CBh启动子共表达humanized Cas9基因和抗药性基因。gRNA慢病毒载体利用U6 promoter表达gRNA，同时携带了一个表达抗药性基因的基因表达盒子。在设计gRNA慢病毒载体时，请选择合适的抗药性基因，两个载体需要不同的抗药性基因配套使用才能筛选出共表达gRNA和Cas9的细胞。

质量控制

我们会对每一个CRISPR/Cas9慢病毒载体挑克隆，并测序gRNA片段。测序正确后，再进行酶切鉴定，酶切鉴定合格后交付。