酵母双杂交文库构建技术服务天津迈基生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:酵母双杂交文库构建技术服务
服务类别:分子生物学服务 -
价格:1元
允许参观:允许参与实验
所在区域:天津.天津
更新时间:2017-11-15 10:48:00
浏览人数:37
诚信指数:7点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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天津迈基生物科技有限公司
地址:
天津国际生物医药联合研究院C座
邮编:
电话:
022-60287398
传真:
010-64197077
联系人:
黄经理
所在区域:
天津·天津
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

酵母双杂交文库构建技术服务

酵母双杂交文库构建技术服务介绍

酵母双杂交技术产生以来,主要应用在以下几个方向:
1、检验一对功能已知蛋白间的相互作用。
2、 研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。
3、 用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库,以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。
4、 分析新基因的生物学功能,即以功能未知的新基因去筛选文库。通常依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到"诱饵"载体,并和GAL4蛋白的DNA结合域(DBD)表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到"猎物"载体,同GAL4的转录激活域(AD)表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时,AD和DBD间距离被拉近,从而激活报告基因的表达。

本服务项目使用infusion重组系统进行重组,使用专利的cDNA合成方法进行cDNA的合成。  

实验步骤  
  1.1.RNA提取 
  1.2.mRNA分离 
  1.3.cDNA合成(使用酶促法直接合成,不经过PCR扩增过程,比SMART方法质量大大提高) 
  1.4.cDNA长度分级
 1.5.分级后的cDNA与酵母双杂载体(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等载体,或者客户指定载体)进行infusion重组。 
  1.6.重组后产物电转化感受态细胞 
  1.7.文库铺板检测与菌液保存 
  1.8.文库质粒提取 
  
产品内容 
  我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),文库甘油菌,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告,酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。 

 
质量标准   
 3.1 文库库容量:大于1*10^7CFU。
 3.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。
 3.3 阳性率:大于95%。  
 
服务时间 
 20个工作日内
 备注1:该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤,我们使用DSN法均一化方法,可以构建出高质量的均一化酵母杂交文库,可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。  

提供的产品
  ♦ 详细的实验报告  
  ♦ 酵母双杂交(酵母单杂交)文库质粒、菌液  
  备注2:如果客户需要转化酵母,我们可提供100管酵母甘油菌工作液及母液(同clontech)。  
 
服务周期
 获得合格的总RNA后25工作日,如需转化酵母延长15个工作日。 
  
材料要求 
  客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库,由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可:
  细胞样本:细胞数量大于1*10^7 
 动物样本:大于1g 
  物样本:大于2g 
 总RNA:大于200ug 


咨询与订购

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网站:http://www.mogenetics.com  
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