基因表达量检测上海吉真生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:基因表达量检测
服务类别:分子生物学服务 - 其它
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2017-11-26 9:44:00
浏览人数:22
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海吉真生物科技有限公司
地址:
闵行区瓶安路1358号久创科技园3号楼502
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电话:
021-64020112
传真:
021-64020112
联系人:
朱方伟
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

介绍

  荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。 荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时***反应过程。随着PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNARNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。

检测分类

1. mRNA表达量水平检测:相对定量法。
2. MicroRNA
表达量水平检测:通过设计特殊茎环结构的反转录引物,结合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平。内参基因一般用U6 
3. 
基因拷贝数检测:如检测样品中不同细菌含量、基因工程菌目的基因拷贝数、环境中耐药基因检测等。采用绝对定量法。

定量方式

1. 绝对定量:用已知浓度的标准品绘制标准曲线,而后通过标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量(起始拷贝数)分析。
2. 
相对定量:以内参基因为参照,比较两个或两个以上样本中某个基因表达量的变化,通常用来对mRNA表达量进行分析。一般采用2ΔΔ Ct  法进行计算。每个样本重复三次。

检测方式

1. SYBR Green Ⅰ法:

         PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2. TaqMan探针法:

        探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

样品要求

■ 须提供新鲜的足量材料(细胞数106个以上,组织100 mg以上),样品-70℃快递至本公司(干冰或液氮运送,以保证样品质量),亦可提供保证质量的DNARNA样品(2 μg以上);

■ 提供靶基因信息,包括基因序列或GenBank Accession Number等;

■ 提供详细的背景资料,生物物种信息(HumanMouseRat等)、DNA/RNA来源、基因丰度等。

提供结果

引物和探针及序列,胶图,原始数据(包括扩增曲线和熔解曲线)、数据分析结果及实验报告。

检测周期

常规检测任务23周内完成,具体情况根据要检测的基因和样本数而定。

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