CRISPR/Cas9敲除细胞系构建南京蓝盾生物科技有限公司

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:CRISPR/Cas9敲除细胞系构建
服务类别:其它服务 - 实验室定制服务
价格:16000元
允许参观:允许参与实验
所在区域:江苏.南京
更新时间:2018/10/22 10:03:00
浏览人数:78
诚信指数:55点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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南京蓝盾生物科技有限公司
地址:
南京市栖霞区生命科技创新园F7楼6层
邮编:
电话:
18094221815
传真:
025-52806140
联系人:
王赫
所在区域:
江苏·南京
邮件:
公司展台:
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我是3516703734,请问我有什么可以帮到您呢?

技术服务详细描述

    服务简介          

根据给定GeneID或DNA序列,设计3个敲除位点,合成正负Oligo DNA,构建敲除载体,通过测序验证载体是否构建成功。在构建成功的基础上,中量摇菌,提取去内毒素的浓度达到1μg/μl 的质粒,并转染细胞,进行敲除效率验证。敲除效率验证一般在Hela细胞上进行,也可以在指定细胞上进行验证。在PCR扩增基因编辑区域的DNA后,通过测序验证敲除效率,一般测序峰图在敲除位点附近出现套峰时,说明该位点的敲除效率较高。

    技术信息          

1. 基因敲除(Gene Knockout)

Cas9系统使目标区域的基因组断裂,利用基因组自身的非同源末端连接的修复机制,在完成修复的过程中,原断裂处会出现不可预知的插入、缺失、突变,从而将生物体(或细胞)中的基因改变成无功能性基因(无效等位基因:null allele)的一种遗传学技术。

2. 基因敲除技术特点

2.1 通过将基因敲除的个体或细胞与正常的个体或细胞相比较,研究者可以揭示特定基因的功能。
2.2 在基因组水平上将目标基因修改或变成无效等位基因,遗传背景干净清晰,是研究基因功能的金标准。

3. CRISPR/Cas9技术与RNAi技术的比较

3.1 CRISPR/Cas9技术优势
(1)在基因组水平上编辑目标基因,高度模拟目标模型。
(2)遗传背景干净清晰,多次重复实验结果更稳定。
(3)技术热点高增加文章的影响力。
3.2 RNAi技术的缺点
(1)仅部分抑制该基因的功能。
(2)在转录后(包括翻译)水平上下调基因表达,非基因组水平上的彻底改变!
(3)会出现每次实验间的误差。
(4)非特异性强;脱靶效率高(Smith et al., 2017. Evaluation of RNAi and CRISPR technologies by large-scale gene expression profiling in the Connectivity Map. PLoS Biol 15(11): e2003213. )


     蓝盾优势          

1.特有的检测手段可大大缩短服务周期
2.可同时进行支原体检测以及目标细胞株的STR鉴定

3.若实验未按预期完成,技术费用全免!
4.相邻的10bp内多位点的突变与单一点突变价格相同


      蓝盾服务     

 客户只需提供GeneID——基因分析以及细胞状态评估———构建载体——细胞转染——单克隆筛选——目标基因敲除的细胞株的获得

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