RNAi技术服务基尔顿生物科技(上海)有限公司

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技术服务信息

服务名称:RNAi技术服务
服务类别:分子生物学服务 - 细菌菌株构建服务
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2019/6/25 10:04:00
浏览人数:61
诚信指数:199点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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基尔顿生物科技(上海)有限公司
地址:
上海市长江南路180号长江软件园B区B638室
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传真:
021-55130728
联系人:
张经理
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上海·上海
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技术服务详细描述

RNAi技术服务: 
近年来的研究表明,将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,从而抑制其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制(Post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。由于RNAi具有高度的序列专一性,可以特异地使特定基因沉默,获得功能丧失或降低突变,因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具,用于功能基因组的研究。
上海基尔顿生物应用国外知名公司的RNAi Designer平台,可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析,完成siRNA/miRNA多种序列的的设计,并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

a,siRNA合成
对于瞬时基因沉默实验,化学合成siRNA的方法操作简便,容易获得高水平的瞬时沉默效果,特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性;针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到75%(在转染效率大于80%的情况下)。
在RNAi效应阶段,siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上,并在距离siRNA 3’端12个碱基的位置切割mRNA。
实验流程:
1)根据序列信息,进行化学合成;
2)纯化及定量;
3)冻干处理;
4)细胞转染预实验,优化转染条件;
5)瞬时转染或稳定转染;
6)RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。
客户提供:
1) 目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属)以及技术要求(包括OD和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等);
2) 细胞株和详细的细胞培养的操作步骤;
3) 一抗(如果需要Western blot检测)。
我们提供:
1)转染效率分析;
2)Knockdown结果。
质量保证:
针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75%(在转染效率大于80%的情况下)。
b,构建shRNA
 
构建shRNA表达载体,实现shRNA在细胞中稳定表达,能够弥补瞬时转染持续时间短的不足。
服务流程:
1)mRNA序列分析;
2)引物设计及合成;
3)单链互补引物退火;
4)将片段克隆至载体;
5)测序以确保插入序列正确性;
6)细胞转染预实验,优化转染条件;
7)瞬时转染或稳定转染;
8)RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。
客户提供:
1) 目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属);
2) 细胞株和详细的细胞培养的操作步骤 ;
3) 一抗(如果需要Western blot检测)。
我们提供:
1) 构建好的表达载体和相应的甘油菌;赠送阴性对照甘油菌;
2) 测序报告 ;
3) 转染效率分析 ;
4) Knockdown结果。
质量保证:
针对某靶基因设计的3条shRNA序列,在转染效率>80%的前提下,我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率。
c,构建shRNA 
RNAi载体利用细胞内源性的miRNA加工机制,相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构,并具有采用GFP进行表达追踪的优点。每个基因设计的4条序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的Knockdown效率(在转染效率大于80%的情况下)。
实验流程:
1)针对特定基因,设计miR RNAi序列,合成该序列并退火生成双链DNA;
2)将DNA与载体连接并转化;
3)测序验证miRNA序列的正确性;
4)细胞转染预实验,优化转染条件;
5)瞬时转染或稳定转染;
6)RT-PCR或Western blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。
客户提供:
1) 目的基因的Accession Number(Human、Mouse或Rat种属);
2) 细胞株和详细的细胞培养的操作步骤 ;
3) 一抗(如果需要Western blot检测)。
我们提供:
1) 构建好的表达载体和相应的甘油菌;赠送阴性对照甘油菌;
2) 测序报告 ;
3) 转染效率分析 ;
4) Knockdown结果。
质量保证:
针对某靶基因设计的3条miRNA序列,在转染效率>80%的前提下,我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率。
服务说明:
1. RNAi技术服务不包括基因功能检测,如需检测,需要另外评估和收费;
2. 客户可以提供实验原材料,也可以查找本公司模板库、载体库、细胞库,也可以由我们公司代购;

目前,基尔顿生物科技(上海)有限公司,主营实验技术服务、SCI论文服务、动物模型构建、细胞株、elisa试剂盒等,欢迎广大科研爱好者前来咨询选购!

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