技术服务信息
技术服务详细描述
CRISPR/Cas9是一种能够对基因组的特定位点进行精确编辑的技术。其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA（guide RNA, gRNA）识别特定基因组位点并对双链DNA进行切割，细胞随之利用非同源末端连接(Non homologous End Joining，NHEJ）或者同源重组（Homologous Recombination, HR）方式对切割位点进行修复，实现DNA水平基因敲除或精确编辑。
利用CRISPR / Cas9 进行单基因敲除
目前研究最透彻、应用最广泛的II 型-CRISPR/Cas9 系统由两部分组成：
1. 单链的guide RNA（single-guide RNA，sgRNA）
2. 有核酸内切酶活性的Cas9 蛋白
CRISPR/Cas9 系统利用sgRNA 来识别靶基因DNA，并引导Cas9 核酸内切酶剪切DNA（图1）。当基因组发生双链DNA 断裂后，细胞通过非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ) 将断裂接合，在此过程中，将随机引入N 个碱基的缺失或增加，若N 非3 的倍数，则目的基因发生移码突变，实现基因敲除。CRISPR 相对ZFN，TALEN 等基因打靶技术而言更为简单，廉价，高效，已经得到广泛应用。
图1 CRISPR / Cas9 KO 原理
CRISPR/Cas9 基因敲除优势
RNA 干扰是从mRNA 水平对目的基因进行敲减，而Cas9 是从基因组水平对基因进行敲除，可完全消除目的基因在细胞内的表达，靶蛋白的功能也因此完全丧失。此外，CAS9 靶点选择范围可以扩大到所有基因组序列，如启动子、内含子等等都可以被剪切（表1）。
表1 CRISPR/Cas9 基因敲除与RNAi 比较
产品介绍
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