技术服务信息
技术服务详细描述
CRISPR/Cas9是一种能够对基因组的特定位点进行精确编辑的技术。其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA(guide RNA, gRNA)识别特定基因组位点并对双链DNA进行切割,细胞随之利用非同源末端连接(Non homologous End Joining,NHEJ)或者同源重组(Homologous Recombination, HR)方式对切割位点进行修复,实现DNA水平基因敲除或精确编辑。
利用CRISPR / Cas9 进行单基因敲除
目前研究最透彻、应用最广泛的II 型-CRISPR/Cas9 系统由两部分组成:
1. 单链的guide RNA(single-guide RNA,sgRNA)
2. 有核酸内切酶活性的Cas9 蛋白
CRISPR/Cas9 系统利用sgRNA 来识别靶基因DNA,并引导Cas9 核酸内切酶剪切DNA(图1)。当基因组发生双链DNA 断裂后,细胞通过非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ) 将断裂接合,在此过程中,将随机引入N 个碱基的缺失或增加,若N 非3 的倍数,则目的基因发生移码突变,实现基因敲除。CRISPR 相对ZFN,TALEN 等基因打靶技术而言更为简单,廉价,高效,已经得到广泛应用。
图1 CRISPR / Cas9 KO 原理
CRISPR/Cas9 基因敲除优势
RNA 干扰是从mRNA 水平对目的基因进行敲减,而Cas9 是从基因组水平对基因进行敲除,可完全消除目的基因在细胞内的表达,靶蛋白的功能也因此完全丧失。此外,CAS9 靶点选择范围可以扩大到所有基因组序列,如启动子、内含子等等都可以被剪切(表1)。
表1 CRISPR/Cas9 基因敲除与RNAi 比较
产品介绍
CRISPR/Cas9慢病毒
CRISPR/Cas9腺相关病毒
CRISPR-Pool TM 全基因组筛选文库现货产品,点击查询与购买>>
查看CRISPR / Cas9 产品的用户还对以下产品感兴趣









