Western Blottting工作流程,GE领先解决方案通用电气医疗集团生命科学部(GEHC)

金牌供应商 

技术服务信息

服务名称:Western Blottting工作流程,GE领先解决方案
服务类别:免疫学服务 - 免疫组化/免疫沉淀/Western blot
价格:100元
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2019/8/15 9:05:00
浏览人数:309
诚信指数:1494点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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通用电气医疗集团生命科学部(GEHC)
地址:
上海浦东张江高科技区华佗路1号
邮编:
100176
电话:
800-810-9118
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联系人:
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

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GE为您提供WB实验专业的全套解决方案!
 

问题 可能原因 解决方法 推荐
无信号 一抗和二抗不匹配 二抗需和一抗宿主的物种相同(如一抗来自兔,二抗为抗兔抗体)。 抗体查询点击此处
没有足够的一抗或二抗结合目标蛋白 使用高浓度抗体,延长4℃孵育时间(如过夜)。 抗体查询点击此处
封闭剂与一抗或二抗有交叉反应 使用温和的去污剂如吐温-20,或更换封闭剂(常用的脱脂奶粉、BSA、血清或明胶)。 封闭剂查询点击此处
一抗不识别检测物种的蛋白 参照说明书,比对免疫原序列和蛋白序列以确保抗体和目的蛋白会发生反应,设置阳性对照。 抗体查询点击此处
转膜不充分 使用可逆染色剂例如丽春红S检测转膜效果,检查转膜操作是否正确。PVDF膜需预先浸在甲醇中,然后浸到转移缓冲液中。 转膜查询点击此处
洗膜过度 勿过度洗膜。 转膜查询点击此处
过度封闭使目标蛋白不能显色 代替5%脱脂奶粉,使用含0.5%脱脂奶粉或无脱脂奶粉的抗体稀释液,或更换封闭剂,减少封闭时间。 封闭剂查询点击此处
一抗失效 使用新鲜一抗,重复使用有效浓度会降低。 抗体查询点击此处
二抗受叠氮钠抑制 避免叠氮钠和HRP标记抗体一起使用。 抗体查询点击此处
检测试剂盒过期和底物失活 使用新鲜的底物。 检测试剂查询点击此处
背景高 未进行非特异性封闭或封闭不充分 延长封闭时间,考虑更换合适的封闭剂。推荐使用5%脱脂奶粉、3%BSA或血清封闭30分钟。这些可以包含在抗体缓冲液中。 封闭剂查询点击此处
一抗浓度过高 稀释抗体至合适浓度,以更高稀释度抗体孵育更长时间。 抗体查询点击此处
抗体孵育温度过高 4℃孵育。 抗体查询点击此处
二抗与封闭剂非特异性结合或反应 设置二抗对照(不加一抗)。 抗体查询点击此处
一抗或二抗与封闭剂有交叉反应 在孵育和洗涤液中加入温和去污剂如吐温-20。脱脂奶粉含有酪蛋白,该蛋白本身就是一种***酸化蛋白,会结合***酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作为封闭剂。 抗体查询点击此处
未结合蛋白质洗涤不充分 增加洗涤次数。 转膜查询点击此处
膜的选择导致的高背景 NC膜比PVDF膜背景低。 NC膜查询点击此处
膜干燥 在孵育过程中防止膜变干,在任何步骤都保证膜有充分的反应液,放入搅拌子不断搅动或轻轻震荡使膜浸在溶液中。 转膜查询点击此处
“微笑”条带 迁移过快;电泳温度过高(改变了PH值和迁移速度) 降低迁移速度或低温电泳(冰库或冰上) 电泳试剂查询点击此处

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  • 高质量的signal/noise比值和线性范围
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