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化学遗传抑制rAAV-nEF1a-fDIO-hM4D(Gi)-EGFP

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产品名称: 化学遗传抑制rAAV-nEF1a-fDIO-hM4D(Gi)-EGFP

英文名称: rAAV-nEF1a-fDIO-hM4D(Gi)-EGFP

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rAAV: Recombinant adeno-associated virus, 重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少被免疫系统所清除),表达时间长。

n Ef1αEf1α缩小版广谱性启动子
fDIO或者称fDiO (Flp controled Double-floxed inverse Orientation),是和Flp配合控制目的基因表达的元件,一般由两对互不相容的Frt序列组成,特征序列是Frt-间隔1-Frt5-GOIr-Frtr-间隔2-Frt5r。当有Flp存在时,任一对Frt序列都有可能发生重组,因为每对Frt都是相反方向的,所以重组会导致他们之间的序列发生颠倒,例如Frt先发生重组会形成Frt-GOI-Frt5r-间隔1r-Frtr-间隔2-Frt5r,这时两个Frt5的方向由之前的相反变成相同,它们之间发生第二次重组就会使Ftrr缺失,形成Frt-GOI-Frt5r,由于Frt和Frt5之间不能发生重组,目的基因的位置就固定下来。Frt5先发生重组,结果也是一样的。通常我们会插入目的基因使它的序列和启动子相反,也就是刚开始的时候不表达,Cre作用后目的基因开始表达。
hM4D(Gi):hM4D(Gi)是从人毒蕈碱乙酰胆碱受体M4 上改造的仅对CNO(clozapine-N-oxide)有反应的人工受体(designer receptors exclusivelyactivated by designer drugs,DREADD),不再受乙酰胆碱激活。在一些神经元里,CNO 结合hM4D 后,激活Gi 蛋白偶联的内向钾离子通道GIRK,使得细胞膜超极化,抑制神经元细胞动作电位发放。在不表达GIRK 或是Gi 的细胞中,hM4D 的功能会有所不同。