服务流程
服务说明
流式细胞凋亡检测
吉凯基因可根据客户选择或细胞外源表达的荧光类型，相应提供Annexin V单染或Annexin V & PI双染凋亡检测，满足不同的实验需求。
技术原理
正常细胞中，磷酯酰丝氨酸（PS)主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型细胞的PS都会外翻到细胞表面，暴露在细胞膜外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，具有易于结合磷脂类的特性，对PS有高度的亲和性，因此，Annexin V标记上荧光素可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS，从而检测处于早期凋亡的细胞。
PS 外翻不是早期凋亡细胞独有，也发生在中、晚期凋亡和坏死细胞中。但早期凋亡细胞的细胞膜是完好的，而中、晚凋和坏死细胞的细胞膜完整性已经丧失。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
吉凯应用实例
用待研基因shRNA慢病毒感染A549细胞，5天后收集细胞，用APC标记的Annexin Ⅴ染色，经流式细胞仪（Millipore，Guava easyCyte HT）检测，结果显示，shRNA下调目的基因表达后，凋亡细胞显著增多，表明待研基因与A549细胞凋亡显著相关。
流式细胞周期检测
通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态，从而计算出各时相的百分率。
技术原理
细胞周期（cell cycle)：是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2/M期组成。G0/G1期：二倍体细胞的DNA含量(2N)。S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。G2/M期：DNA复制结束成为4倍体（4N)。
碘化丙啶(Propidium, PI)为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA或RNA双链螺旋的碱基之间，产生红色荧光，并且荧光强度和所嵌入的核酸含量成正比。细胞周期检测时，首先用RNA 酶将RNA消化排除影响，通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态，从而计算出各时相的百分率。
吉凯应用实例
用待研基因shRNA慢病毒感染U-2OS细胞，5天后收集细胞，PI染色，经流式细胞仪（Millipore，Guava easyCyte HT）检测，结果显示，shRNA下调目的基因表达后，G1期细胞减少(P<0.05)， G2期细胞增多(P<0.05)，表明待研基因与U-2OS细胞周期显著相关。
上海吉凯基因医学科技股份有限公司
地址：上海张江高科技园区爱迪生路332号 邮编：201203
客服热线：400-621-0302
邮箱: service@genechem.com.cn
售前顾问： 18516626958； 18939810765； 18516626959
官网：http://www.genechem.com.cn
