1D SDS-PAGE和IEF服务北京百泰派克生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:1D SDS-PAGE和IEF服务
服务类别:蛋白相关服务 - 蛋白分析服务
价格:200元
允许参观:允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2020/11/16 16:53:00
浏览人数:28
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京百泰派克生物科技有限公司
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技术服务详细描述

百泰派克生物科技提供一站式蛋白质凝胶服务相关解决方案,包括SDS-PAGE、IEF和Native PAGE分析。

1D SDS-PAGE服务


polyacrylamide凝胶电泳(PAGE)是分离大分子最常用的技术之一,包括DNA,RNA和蛋白质。电泳过程是通过施加电场作用使带电离子进行迁移的过程。在该技术中,带电分子的迁移率与其净电荷和通过的溶液的电阻成正比。十二烷基硫酸钠(SDS)是一种阴离子去污剂,溶解过程中,其分子在较广pH范围内具有净负电荷。多肽链与其相对分子质量成比例地结合一定数量的SDS,SDS上的负电荷破坏蛋白质的大多数复杂结构。

将蛋白质混合物添加到凝胶上样空中后,可能会出现最大的蛋白质还没有迁移到凝胶上时,最小的蛋白质在已经跑出了凝胶的现象。因此为了获得更好的分离效果,利用凝胶的特性,将凝胶分为浓缩胶和分离胶两层的方法能够解决该问题。PAGE胶底部是较大的分离胶,顶部是较窄的浓缩胶。电泳缓冲液由甘氨酸制成,pH 8.3,浓缩胶的pH值为6.8,而分离凝胶的pH值为8.8。电泳期间,电流由带负电荷的分子携带向同一个方向迁移。由于在pH 8.3时仅有约10%的甘氨酸分子带负电荷,因此此处的电流主要由堆积缓冲液中的Cl-携带,Cl-离子赶在蛋白质之前朝堆积凝胶底部堆积。从而使得由SDS包裹的蛋白质分子被夹在位于上方的甘氨酸分子和下方的Cl-之间,并被浓缩成比最初加载的体积小得多的条带。

随着电流作用绩效迁移,蛋白质迁移到分离胶中。此时,pH为8.8的分离凝胶缓冲液中的甘氨酸成为带负电荷的分子,能够非常快速的迁移,几乎与Cl-离子保持一致,而蛋白质紧随其后。此时蛋白质经由Cl-和甘氨酸阴离子的移动轨迹进入分离凝胶而携带电流。蛋白质变成一种具有类似流体动力学性质的杆状带负电荷高分子,其迁移率仅取决于其分子质量。

SDS-PAGE广泛应用于蛋白质组学分析,包括蛋白质分子量测定蛋白质鉴定,样品纯度分析,二硫键鉴定蛋白质定量等。

等电聚焦IEF分析服务

 

等电聚焦(IEF)是一种基于蛋白质等电点(pI)分离蛋白质的一种电泳技术。当pI=PH时,蛋白质净电荷为0,因此蛋白质不会在电场中迁移。在IEF中,蛋白质的分离是在含有两性电解质混合物的polyacrylamide或琼脂糖凝胶中进行的,两性电解质在电场中迁移并在凝胶中形成pH梯度。蛋白分子被集中在一个具有pH梯度的介质中,通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电的蛋白质分子会向与其有相反电荷的一极运动,直到与周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动,即蛋白质净电荷为0时。

于是,具有相同等电点的蛋白质集中在pH固定的条带中。每种蛋白质都位于pH梯度中与其pI相对应的位置。IEF技术具有极高的分辨率,即使仅有一个电荷不同的蛋白质,也会被分到不同的条带。

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