Far-Western Blot分析北京百泰派克生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:Far-Western Blot分析
服务类别:分子生物学服务 - 其它
价格:200元
允许参观:允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2020/11/16 17:15:00
浏览人数:21
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京百泰派克生物科技有限公司
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技术服务详细描述

Far-Western Blot是一种基于Western Blot技术的分子生物学方法,可用于检测体外蛋白质与蛋白质的相互作用,尤其是不需要目标蛋白质的天然结构的相互作用检测。

Far-Western Blot技术的整体工作流程与Western Blot相似,只是Western Blot中探测目标蛋白质需要抗体,而Far-Western Blot分析中不需要抗体,而是使用经过纯化和标记的“诱饵”蛋白来探测和检测膜上的目标蛋白。在Western Blot和Far-Western Blot中,蛋白质都是通过SDS凝胶和native PAGE凝胶对样品进行分离,然后将蛋白质从凝胶转移到膜上。转模后,用BSA进行封闭。在膜上对蛋白质进行变性和复性,及后续的检测步骤。Far-Western Blot技术用商业化的高度纯化的诱饵蛋白将膜标记上探针。在诱饵蛋白与目标蛋白反应后,根据所使用的诱饵蛋白,可以检测到与该目标蛋白相对应的条带。

为了鉴定与给定蛋白相互作用的蛋白,Far-Western Blot是一个实验成本低、灵敏度高的有效平台。远western blotting的原理是对western blotting的改进,以自然折叠的重组蛋白作为第一个探针,与转染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-Western Blot使用的第二个探针是针对给定蛋白的特异性抗体,而酶标的第三个探针是针对第二个探针的抗体。当与LC-MS-MS蛋白鉴定相结合时,可以对得到的蛋白斑点(或蛋白条带)进行表征,然后进行进一步的功能分析,如蛋白免疫沉淀等。

Far-Western Blot分析时,当需要保留蛋白质的天然构象和天然相互作用时需要注意以下问题:1)变性条件下在SDS凝胶中分离的蛋白质可能会发生变性,而变性蛋白可能不会与诱饵蛋白发生反应,从而导致无法识别出相互作用。2)在结合之前将蛋白质变性并复性,也可能导致蛋白质发生构象变化,从而影响靶蛋白与诱饵蛋白的结合。3)如果结合位点受其它因素影响,失去与诱饵蛋白的结合能力,使诱饵蛋白无法与之反应,也可能导致相互作用检测失败。更棘手的是,以非天然构象呈现的蛋白质可能以新的非天然方式发生相互作用,导致检测假阳性。

百泰派克生物科技提供Far-Western Blot分析服务,可以根据您的需求定制实验,并对可能影响结果的潜在因素进行评估。我们承诺给出的数据可靠,且可重复性高。


Far-Western Blot分析的优势

 

• 可用于体外蛋白质相互作用研究
• 分析蛋白的结合域
• 比较蛋白质结合的亲和力
• 无需特异性抗体

Far-Western Blot分析的工作流程

 

1. 定量蛋白质,并通过SDS或native PAGE分离
2. 将蛋白质从凝胶转移到膜上
3. 将蛋白质进行变性和复性,以保证膜上的蛋白质结合位点充分暴露
4. BSA缓冲液对膜进行封闭
5. 将膜与纯化的诱饵蛋白进行孵育
6. 检测诱饵蛋白信号
7. 图像分析及报告交付

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