平板克隆【实操干货】北京百奥思科生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:平板克隆【实操干货】
服务类别:细胞生物学服务 - 细胞培养服务
价格:详询【微信】18632689188
允许参观:允许参与实验
所在区域:河北.廊坊
更新时间:2020/12/17 13:39:00
浏览人数:18
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京百奥思科生物科技有限公司
地址:
河北固安肽谷生物医药产业园
邮编:
电话:
19931682702
传真:
联系人:
石老师
所在区域:
河北·廊坊
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

平板克隆

平板细胞克隆形成试验

克隆形成试验可反映细胞群体依赖性和增殖能力。一般细胞在体外增殖六代以上,其后代形成的细胞群体称为细胞集落或克隆。每个克隆由单一细胞而来,含有50个以上细胞,大小在0.3-1mm之间。通过克隆形成可检测各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。平板克隆形成试验可检测贴壁细胞细胞的克隆形成能力,软琼脂集落形成试验可检测非锚着依赖生长的细胞,如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系等。

基本步骤:

1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。

3、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。

4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

注意事项1. 试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。


2. 细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度,否则结果的准确度会受到很大影响。

其他1. 克隆形成率公式:克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)×100% ,细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。


2. 一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。

服务流程:

1) 项目方案的确定,包括目的细胞、细胞处理方式及处理时间等。

2) 细胞培养

3) 克隆形成实验

4) 克隆形成实验图片及实验报告

服务周期:3~5周

MDL服务项目
动物实验相关、WB、IP和Co-IP服务、蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、明胶酶谱、细胞增殖、细胞培养、细胞周期凋亡、平板克隆、免疫荧光、免疫组化、常规及特殊染色、包埋切片爬片、定量pcr、elisa检测服务、普通生化试剂盒检测、全自动生化检测项目等。


        (MDL部分动物模型,更多实验技术服务可详询)
MDL服务优势
项目均配备专职项目经理及技术支持,对每一项目进行全程跟踪反馈及管理,确保项目完成情况。周期短,价格优惠,质量保证,售后无忧;公司总部坐落于北京,实验室拥有4000多平的平台,拥有自己独立的实验室,相应的仪器设备及优秀的技术团队、销售团队,可随时参观,客户可参与实验。


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        【QQ】2177827493

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