免疫组化(IHC)实验实操技巧总结!北京百奥思科生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:免疫组化(IHC)实验实操技巧总结!
服务类别:免疫学服务 - 免疫组化/免疫沉淀/Western blot
价格:详询【微信】18632689188
允许参观:允许参与实验
所在区域:河北.廊坊
更新时间:2020/12/29 8:55:00
浏览人数:20
诚信指数:5点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
点此求购 我要咨询
生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

供应商联系卡

北京百奥思科生物科技有限公司
地址:
河北固安肽谷生物医药产业园
邮编:
电话:
19931682702
传真:
联系人:
石老师
所在区域:
河北·廊坊
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述


一提到免疫组化(IHC)实验,繁琐的操作步骤总是叫人头疼。实际IHC 实验并不算难,但由于操作步骤较多,因此造成影响实验结果的因素较多,可谓是稍有疏忽就全盘皆输。但也不是没有办法解决,现在我们就将免疫组化操作中常见问题和解决方法汇总给大家,希望能帮助到你。
No.1:切片染色深
问题原因:一抗浓度过高是造成切片染色深常见的原因之一。
解决方法:是在每次使用新抗体前对其工作浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,包括即用型的抗体也同样需要进行测试,不能只简单的按照说明书进行染色。

No.2:时间过长或温度过高影响实验结果
问题原因:忽视操作规程,没有严格控制时间,因遗忘而造成时间延长或温度过高。解决方法:实验人员应当严格执行操作规程,随身佩带报时表或报时钟,及时提醒。现在流行的二步法敏感性很高,要求一抗孵育的时间不是传统的 1 小时,而是 30 分钟,因此,要根据染色结果进行调整。

No.3:DAB显色不理想
问题原因:DAB 变质或显色时间太长。
解决方法:DAB 最好现用现配,如有沉渣,应进行过滤后再使用。当染色片太多或使用染色机,导致无法及时进行终止操作时,也应该尽量对新的,或使用频率不高的抗体,进行显色时的***,避免显色时间过长。

配制好的 DAB 不应存放时间太长,因为在没有酶的情况下,过氧化氢也会游离出氧原子与 DAB 产生反应,从而降低 DAB 的效力;像未用完的 DAB 存放在冰箱里,需要的时候再取用的这种行为也是不可取的。DAB 的显色最好在显微镜下***,待达到理想的染色程度时,应立即终止反应。

No.4:组织变干
问题原因:修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因
解决方法:实验人员在操作过程中要做到仔细认真,并采用 DAKO 笔或 PAP Pen 在组织周围画圈,达到有效的避免液体流失,提高操作速度的效果。

No.5:切片背景着色
问题原因:切片在缓冲液或修复液中浸泡时间大于 24 小时,并切放置在室温下,特别是炎热的夏天,就会出现背景着色。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复,第二天加抗体进行免疫组化染色,如果将装有切片和修复液的容器放在 4oC 冰箱过夜,对结果无明显影响。
解决方法:室温下不可存放时间太长,尤其是夏天。切片和修复液如需过夜,最好存放在 4oC 冰箱内。

No.6:切片不显色或者背景着色
问题原因:一抗变质、质量差的多克隆抗体,是导致切片不显色或者背景着色的主要原因。
解决方法:一定要注意一抗的有效期,用新买抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

No.7: 非特异性染色
问题原因:忘记血清封闭,在免疫组化中使用封闭血清,可以消除非特异性染色,提高目的蛋白的准确性和降低背景。
解决方法:封闭血清一般选择和二抗来源相同的,因此常用山羊血清。有时也会使用小牛血清、BSA、羊血清等,但不可与一抗来源相同。

No.8:操作过程中脱片
(1)黏附载玻片质量的问题。遇到这种情况建议尝试更换载玻片。
(2)组织切的不好。原因可能是切片机刀片较钝造成切片切的厚、不均匀,或者是切片机操作者手法不熟练等。
(3)组织本身的问题。比如癌症组织有坏死情况时,也容易造成脱片。
(4)烘烤结果不理想。可能是烘烤时间较短或温度不够等。
(5)操作时甩动幅度过猛。有脱片嫌疑的切片最好不甩或轻轻甩,可用卫生纸从边缘上慢慢吸水。
(6)修复过程出现问题,也容易出现脱片。比如在抗原修复时,高压时间过长,或者放进 100 度修复液时不够平稳。
(7)用 EDTA 修复比柠檬酸更容易脱片。
(8)使用 PBS 的时候尽量泡,不要冲。一旦见到有组织漂起来,操作时要更加谨慎。

MDL服务项目
动物实验相关、WB、IP和Co-IP服务、蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、明胶酶谱、细胞增殖、细胞培养、细胞周期凋亡、平板克隆、免疫荧光、免疫组化、常规及特殊染色、包埋切片爬片、定量pcr、elisa检测服务、普通生化试剂盒检测、全自动生化检测项目等。

MDL服务优势
项目均配备专职项目经理及技术支持,对每一项目进行全程跟踪反馈及管理,确保项目完成情况。周期短,价格优惠,质量保证,售后无忧;公司总部坐落于北京,实验室拥有4000多平的平台,拥有自己独立的实验室,相应的仪器设备及优秀的技术团队、销售团队,可随时参观,客户可参与实验。


生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

查看免疫组化(IHC)实验实操技巧总结! 产品的用户还对以下产品感兴趣

  免疫组化实验步骤   [供应商:武汉博士德生物工程有限公司]
  免疫蛋白印迹(Western Blot)实验   [供应商:北京宝赛生物技术有限公司]
  免疫组化/ELISA/Western Blot/Northern Blot/放射免疫检测   [供应商:上海沃森生物医学科技有限公司]
  Western Blotting   [供应商:上海迪奥生物科技有限公司]
  免疫组化实验   [供应商:武汉博士德生物工程有限公司]
  Western blot 免疫印迹实验   [供应商:复医生科科研服务中心]
  免疫组化(ihc)技术服务   [供应商:上海拜力生物科技有限公司]
  免疫共沉淀(Co-IP)   [供应商:上海玉华生命科技发展公司]
  免疫印迹 Western blot   [供应商:上海捷兰生物技术有限公司]
  免疫组化   [供应商:厦门生命互联科技有限公司]

ADVERTISEMENT

找不到您所需的产品,发布求购试试?

标题:*
描述:
姓名:*
Email:*
单位:*
电话:*
地址:*
邮编:
资料: 需要 不需要
报价: 需要 不需要