RRBS甲基化测序服务

DNA甲基化研究一直是疾病研究的热点,与基因表达、表型性状息息相关。是基因调控的手段之一,通过对位于启动子及第一外显子区的CpG岛的甲基化而抑制基因的表达。在维持细胞正常功能、传递基因组印记,胚胎发育、肿瘤发生等方面起着至关重要的作用。      

RRBS(Reduced Representation Bisulfite Sequencing)是一种准确且高性价比的DNA甲基化研究方法,在大规模临床样本的研究中有着广泛的应用。RRBS通过限制性内切酶对基因组进行酶切,富集启动子及CpG岛区域,再进行Bisulfite转化,用较小的数据量得到包含最多CpG位点甲基化信息的单碱基精度的甲基化图谱。

• 基因组DNA提取:根据不同的样品类型采用不同的提取方案,获取高质量的基因组DNA。

• DNA质量检测:Qubit检测DNA样品浓度,琼脂糖凝胶电泳检测DNA样品完整性。

• MspⅠ酶切:通过酶切富集CpG片段。

• 末端修复,加A,甲基化接头连接:在DNA分子两端引入接头序列及index序列。

• 选择CpG富集的DNA片段

• Bisulfite转化:通过Bisulfite作用将非甲基化碱基C转化成U。

• PCR富集:PCR扩增富集文库片段。

• 文库质检:Agilent 2100 Bioanalyzer检测文库大小分布,Qubit 3.0或荧光定量PCR测定文库浓度。

• 上机测序:根据数据量要求将文库pooling上机测序。

• 数据分析:下机数据由专业生物信息分析团队进行数据分析,提供全面数据分析报告。

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