精准基因编辑细胞株定制

随着ZFN、TALEN和CRISPR-Cas9技术的兴起，基因组编辑领域获得长远的发展。借助靶向基因组编辑工具，我们可以在基因组水平上精确编辑，设计产生全新的细胞株模型。定制精准编辑细胞株模型(genome edited cell line models)是体内研究基因功能的理想工具，已成为现代生物学在基因功能研究、肿瘤治疗和生物制药等领域重要的研究材料。基因组编辑技术（genome editing）是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。DNA修复系统主要通过两种途径修复DNA双链断裂（double-strand break,DSB）,即非同源末端连接（Nonhomologous end joining, NHEJ）和同源重组（homologous recombination, HR）。北京科沿有道生物科技有限公司不断探索基因组编辑在多种细胞系中的应用，已成功在数十种细胞系中实现了高效基因组编辑。基于慢病毒包装技术、转座子技术及 CRISPR/Cas9 靶向基因编辑技术，推出了精准编辑细胞株定制服务，包括基因敲除、定点基因敲入、点突变和定点基因大片段删除。

基因定点敲入/点突变细胞系

CRISPR-Cas9系统编辑切割产生DNA双链断裂（Double-Strand Breaks， DSBs），可诱发 DNA 的自然修复机制。如果在此基础上同时为细胞引入一个同源性的外源DNA作为修复模板（Donor），该Donor序列上带有目标突变，那么，细胞可据此通过同源重组（Homology-directed Repair， HDR）修复机制获得目标突变，产生目的点突变细胞。若修复模板序列带有目的基因序列，则可通过同源重组机制实现基因定点插入，最长可定点敲入10kb的目的基因。

基因定点敲入/点突变细胞系构建流程

基因定点敲入/点突变细胞系交付材料

1. 靶基因敲除单克隆细胞系冻存细胞2支；

2. 实验测序数据；

3. 详细的实验结题报告（包括实验步骤，引物信息，实验结果等）。

科沿有道基因定点敲入/点突变技术优势：

1. 自主研发优化的CRISPR系统和donor设计，有效提高编辑成功率；

2. 最长可定点敲入10kb的目的片段；

3. 针对不同细胞系制定专属方案，有效提高编辑成功率；

4. 服务团队经验丰富，确保服务质量。

细胞染色体核型分析（Karyotype Analysis）市场宣传资料

染色体核型分析是以分裂中期染色体为研究对象，根据染色体的长度、着丝点位置、长短臂比例、随体的有无等特征，并借助显带技术对染色体进行分析、比较、排序和编号，根据染色体结构和数目的变异情况来进行诊断。核型分析可以为细胞遗传分类、物种间亲缘的关系以及染色体数目和结构变异的研究提供重要依据。

染色体是细胞分裂期高度凝集的DNA蛋白质纤维，是间期染色质结构紧密盘绕折叠的结果。

核型是指一个细胞的染色体按其大小、形态特征排列起来构成的图像。染色体标本经显带技术处理，可使染色体长轴上显示出明暗或深浅相间的带纹，每条染色体都有独特而恒定的带纹。

核型分析：将待检细胞进行染色体数目、形态结构分析，确定其核型是否与正常核型一致。

G显带：用胰蛋白酶处理固定于载玻片上的染色体标本，再用giemsa染液染色的显带技术。

服务项目

人多能干细胞核型分析服务（hiPSC核型鉴定），间充质干细胞核型鉴定（MSC染色体核型分析）；染色体G显带标本制备。肿瘤细胞染色体常规制备

染色体核型分析样本类型

●   人染色体：活细胞、固定细胞、外周血

●   小鼠染色体：固定细胞、外周血、骨髓、脾脏

送样要求

●  固定细胞 -  细胞数量>10^6, 冰袋运输

●  外周血 -  EDTA抗凝血5ml, 冰袋运输

检测周期

收到样本后15-20个工作日。

提供结果

核型分析检测报告。

保密承诺

我公司郑重承诺：客户提供产品的检测信息与数据，履行保密义务，未经客户许可，不得擅自公开发表或使用，不得泄露给第三方。检测产品仅做数据统计用。

SSR多态性引物筛选

选取少量样品，对多对微卫星引物进行筛选，先合成M13接头引物序列对引物进行试验，选出引物效率高扩增稳定且具有多态性的引物，合成荧光标记引物，设计引物组合混检方案进行遗传多样性分析。

技术流程

可提供的服务

（1）基因组DNA提取、扩增、毛细管电泳检测；

（2）按照您实验的要求,为您设计实验方案。包括：荧光标记的选择，M13接头引物、实验条件摸索，内标的选用等等；

（3）合成荧光引物和接头引物；

（4）根据所设计的实验方案用引物完成PCR扩增；

（5）M13-SSR技术结合了SSR与荧光检测优点，M13具有通用性成本相对较低；

（6）GeneMarker软件对收集到的数据进行初步处理分析 , 片段大小的精确分析和等位基因判读解析列到Excel表格中，为您下一步进行关联分析或连锁分析等遗传分析提供数据可靠的数据。

技术优势

（1）成熟的技术平台：美国应用生物系统公司ABI 3130XL基因分析仪、GeneMarker分析软件;

（2）多重检测：如果您研究的位点较多，为了节约您的成本,我们一个泳道可以同时检测3-5种不同的荧光；

（3）周期短：散样一般是从收到订单时起，检测上机只需24-48小时即可收到结果，默认仅提供审核复检；

送样要求

（1）基因组DNA：浓度20-30ng/ul以上，OD260/280在1.7-2.1左右，电泳有基因组主带，需冰袋运输，需要本公司提取基因组，需要阐明特殊样品类型，如多糖多酚样品

（2）可处理的样本类型