生物在线 - 让科研更便捷 :生命科学专业网,试剂,仪器,抗体,耗材在线查询

荧光原位杂交fish、酵母单杂 双杂实验、双萤光素酶实验、凝胶迁移实验EMSA、Southern blot/ Northern blot杂交检测北京科沿有道生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:荧光原位杂交fish、酵母单杂 双杂实验、双萤光素酶实验、凝胶迁移实验EMSA、Southern blot/ Northern blot杂交检测
服务类别:蛋白相关服务 - 酵母双杂交筛选服务
价格:1500元
允许参观:允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2021/9/8 15:33:00
浏览人数:20
诚信指数:5点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
点此求购 我要咨询
生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

供应商联系卡

北京科沿有道生物科技有限公司
地址:
昌平区能源西路1号奇点中心3层
邮编:
102200
电话:
18201011950
传真:
18201011950
联系人:
所在区域:
北京·北京
邮件:
公司展台:
扫一扫,关注我们

技术服务详细描述

酵母单/双杂交市场宣传资料

一、酵母单杂交:

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

二、酵母双杂交:

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。

核蛋白酵母双杂交:

核蛋白酵母双杂交技术最初由Fields等人在研究酵母转录因子GAL4性质时建立,后续经过不断改进已发展成为一种成熟的蛋白-蛋白互作研究工具,具有简便、灵敏、可反映蛋白在活细胞内互作真实情况的特点,被广泛应用于互作蛋白的筛选、蛋白相互作用的鉴定/验证、蛋白互作机理的探究、蛋白连锁图谱绘制等工作。

)膜蛋白酵母双杂交:

DUALmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上,巧妙地利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)进行蛋白质相互作用的筛选;泛素作为降解信号分子,人为分成两部分:N端(Nub),C端(Cub),互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。

三、多领域的研究利器:

植物:自交不亲和机理研究……

病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选……

信号通路:转录因子、雌***α受体相互作用蛋白筛选……

癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选……

寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选……

基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育……

四、独特的技术优势:

一站式辅助检测手段方便快捷,得到可靠的实验结论;

多年文库构建经验,4种优化的Total RNA提取技术方案可以有效保证Total RNA的纯度和完整性,保证样本的多样性;

文库质量保证措施

RNA质量

RNA提取方案-TRIZOL

适用细胞或者动物组织

RNA提取方案-CTAB

适用植物样本中RNA含量超低的样本

RNA提取方案-SDS

适用淀粉含量高的样本

RNA提取方案-试剂盒

适用多糖多酚含量高的样本

高效的SM定向三框文库构建技术可以保证文库的阳性率在98%以上,且一份cDNA样本连接三个不同的读码框载体可以轻松实现三框文库的质控指标零差异,减少文库差异对筛选结果的影响;

定向改造了pPR3-N系列载体为pPR3-GW载体,可以轻松实现核蛋白文库到膜蛋白文库的一步LR反应,获得膜蛋白酵母双杂交文库。

五、文库构建策略比较:

实验步骤

三种文库构建策略比较

ClontechSMART技术

invitrogene技术

专利的三框文库技术

双链cDNA的纯化方法

Spin400纯化柱子

invitrogene DNA分子筛纯化柱

改进的Spin1000纯化柱子,兼顾了片段长度的同时保证样本的回收率在80%左右,有效保证了文库的滴度

双链cDNA与载体的连接

利用酵母体内同源重组酶完成同源重组

gateway方法

专利的三框文库构建策略在原始商业化载体pGADT7pPR3-N系列载体的基础上改造了Sfi ISmal I的酶切位点,用于零背景定向克隆目标cDNA片段。

文库的交付形式

转化到酵母细胞的文库菌

转化到大肠杆菌的文库菌和文库质粒

转化到大肠杆菌的文库菌和文库质粒

文库的用途

改变筛选方案之后可以实现文库的多用途

可以方便的通过一步LR反应实现文库的多用途

可以通过简单的载体改造构建到任意想要的载体上

文库的阳性率

90%左右

90%左右

98%以上

文库的插入片段

800bp以上

1000bp左右

1200bp左右的集中分布

六、服务流程:

酵母单/双杂交文库构建

接收订单及样品RNA提取mRNA纯化反转录双链cDNA合成及纯化共转至酵母感受态细胞(改造的Y1H转化效率测定文库效价测定结果交付

酵母单杂交文库筛选

接收订单及样品诱饵载体及诱饵菌株构建自激活检测克隆数计算阳性克隆菌株鉴定结果交付

酵母双杂交文库筛选

接收订单及样品诱饵载体的构建毒性检测测定杂交效率阳性克隆菌株鉴定结果交付

七、服务内容:

酵母单杂交

服务项目

客户提供

最终交付

文库构建

组织/细胞

滴度在1×108以上的酵母文库菌液;
文库PCR鉴定结果图片(阳性率在80%左右)

文库筛选

promoter基因序列/质粒

筛选过程中的全部原始图片;
筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果

针对酵母单杂交实验结果,可作进一步验证:

服务项目

实验目的

细分

周期(工作日)

EMSA

验证启动子和蛋白互作

探针合成及标记

10

EMSA实验

20

双萤光素梅检测

验证启动子和蛋白互作

载体构建

10-15

双萤光素酶检测

25

注:1. 双萤光素酶检测默认使用293T细胞,使用其他细胞视培养及转染难度议价;

2. 双萤光素酶检测启动子-转录因子验证默认1个转录因子 + 启动子序列WTMut1个;microRNA靶基因验证默认1microRNA + 靶序列WTMut1个,超过以上组合数量请询价。

)酵母双杂交:

服务项目

客户提供

最终交付

文库构建

组织/细胞

滴度在1×108以上的酵母文库菌液;
文库PCR鉴定结果图片(阳性率在90%左右)

文库筛选

蛋白序列/基因序列/质粒

筛选过程中的全部原始图片;
筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果

针对酵母双杂交实验结果,可作进一步验证:

服务项目

实验目的

细分

周期(工作日)

Co-IP

验证蛋白互作

/

20

GST pull-down

验证蛋白互作

GST pull-down+WB/银染

20


EMSA市场宣传资料

实验原理:

凝胶阻滞或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assayEMSA)是一种研究DNA结合蛋白质和相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。

基于DNA-蛋白质或RNA-蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理,当转录因子与特异的DNARNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNARNA结合的蛋白转录或调节因子。

我公司采用Thermofisher公司的LightShift™ Chemiluminescent EMSA Kit进行EMSA检测,灵敏度高,实验周期短,结果可靠。

实验流程:

 

EMSA收样注意事项:

1. 标本收集与保存:

(1) 组织样品新鲜组织放入液氮或-80℃度保存,组织不少于100mg(约绿豆大小);

(2) 培养细胞通过细胞计数取不少于1*106个细胞于EP管,加入0.5 mL生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80℃,避免反复冻融);

(3) 血液细胞标本以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5 mL生理盐水或蛋白保护剂,保存(-80℃可长期保存,避免反复冻融);

(4) 血清或细胞培养液标本离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融);

(5) 蛋白样本依据实验设计每张膜至少提供50 μL,浓度大于0.5 mg/mL

2. 样本运输条件:组织样本和细胞样本均使用干冰运输。

 

服务说明:

1. 需客户提供探针序列;核蛋白、重组蛋白或纯化的因子(至少50 μL,浓度大于0.5 mg/mL)。

2. 公司提供含EMSA图片的实验报告单、胶片、剩余蛋白、探针和抗体。


Northern Blot杂交市场宣传资料

Northern Blot印迹杂交是一项用于检测特异性RNA的技术。其原理为经过琼脂糖凝胶电泳分离的RNA,通过一定方法转移到固相载体上,再与标记的探针进行杂交反应,通过杂交结果可对转录表达进行定量或定性分析。

科沿有道一直将客户至上作为服务理念,急客户之所急,忧客户之所忧。自 Northern Blot服务平台对外开放以来,科沿有道科研人员不断的探索创新,陆续解决了RNA抽提、样品处理、探针设计与标记等技术难题,实验水平大幅提高,实验成功率也趋于稳定。科沿有道人的热忱与执着,是您的不二选择!

 

 

一、Northern Blot服务说明:

服务说明

服务内容

服务周期

地高辛探针标记

PCRDIG探针标记/基因,灵敏度检测

1

 

8个样品+1个阳性对照+1Marker(一张膜)

1-2

说明:为了保证服务品质和实验成功率,请提供高质量的RNA样品,如果需要委托科沿有道提取RNA,请提供新鲜的组织、细胞或菌液,液氮或干冰运输至我公司,同时我们会酌情加收部分服务费用。

 

二、客户提供材料RNA材料要求

1、待杂交目标基因序列和引物序列,及PCR扩增条件以及尽可能详细的背景资料;

2RNA品质的好坏对实验结果影响巨大,请提供待杂交的高质量RNA样品,建议采用进口试剂盒提取RNA

A、 请提供分光光度计检测纯度结果

B、 请确保RNA浓度不低于0.7μg/μl

C、 杂交需模板RNA20μg/泳道/次,请提供足量的RNA样品(最好能满足两次实验)

3、 如需长途运输,可在检测合格的RNA溶液中,加入Trozol1/10体积的3M NaAc pH5.2,混匀后再加2倍体积无水乙醇混匀。

 

三、Northern Blot实验流程

 

四、Northern Blot服务结果文件

科沿有道负责对客户提供样品进行DIG探针标记与Northern杂交检测技术服务,最终提供检测图片和报告

1RNA样品检测报告(实验样品不返还,请注意保留备份)

2、标准Northern Blot实验流程报告

3Northern blot实验结果检测报告

4、如果对实验有额外特殊的要求,请提前致电或邮件说明


Southern Blot杂交市场宣传资料

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法。其原理为利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的DIG标记探针进行杂交,用***自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。

科沿有道自建立Southern Blot杂交服务平台以来,帮助客户完成过拟南芥、大豆、烟草、苎麻、 玉米、棉花、水稻、油菜等多物种检测,成功发表数十篇高水平论文,科沿有道的探针使用DIG(地高辛)标记,具有低噪、高敏、无***性污染等优点,实验过程中保留原始数据和实验材料,数据真实可信,具有可重复性。我们使用传统的胶片曝光与最先进的自动化学发光成像检测系统相结合,确保捕获最佳信噪比的成像时间点,可以交付给客户品质最好的实验结果,客户可直接使用科沿有道提供的southern blot实验数据向高水平的杂志投稿。

一、Southern Blot服务说明:

服务说明

服务内容

服务周期

地高辛(DIG)探针标记

PCRDIG探针标记/基因,灵敏度检测

1

Southern杂交检测

8个样品+1个阳性对照+1Marker(一张膜)

1-2

说明:客户自备样品的,请提供高质量的DNA样品。如果需要科沿有道帮助提取DNA样品,请提供新鲜的细胞、组织或菌液,我们会酌量加收部分服务费用。

二、客户提供材料

1、待杂交目标基因序列和含有待杂交基因的阳性质粒,我们会依据Southern blot实验要求重新选择全长或部分区域作为探针序列,使用PCR法标记地高辛探针。

2、待杂交的高质量DNA样品质量至关重要,决定实验的成败,请确保DNA抽提质量,尽量采用进口试剂盒提取或委托科沿有道提取。

A、基因组DNA检测:OD260/OD280=1.8-2.0,基因组要求DNA总量不小于10ug,浓度大于50ng/ul

B、请提供基因组DNA检测图片,要求无降解,无蛋白污染,电泳检测标准请参考southern blot实验案例

C、检测样品低温运输至公司,或交给我公司外勤人员处理

3、客户如果无法提供高品质的基因组DNA样品,科沿有道可以帮助制备可用于Southern Blot检测的DNA样品,客户提供样品要求如下:

A、菌液:不低于500ul,冰袋或者干冰运输

B、组织:总量不小于100mg,干冰运输

C、细胞:提供新鲜的细胞即可,尽量不要使用盐溶液冲洗

4、请注明基因组DNA酶切方案,如果项目中需要用到非常规的限制性内切酶,需额外加收酶切费用或有客户提供相应的限制性内切酶。

三、Southern Blot实验流程

1、制备待测DNA

2DNA限制酶消化

3、琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品

4、电泳凝胶预处理

5、转膜

6、探针标记

7、预杂交

8Southern杂交

9、洗膜

10、***性自显影检测

11、实验结果分析及报告

四、Southern Blot服务结果文件

科沿有道负责对客户提供样品进行DIG探针标记与Southern杂交检测技术服务,最终提供检测报告及检测图片

1DNA样品检测报告(实验样品不返还,请注意保留备份)

2、标准实验流程报告

3southern blot实验结果检测报告

4、如果是实验有额外的要求,请提前致电或件说明

生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

查看荧光原位杂交fish、酵母单杂 双杂实验、双萤... 产品的用户还对以下产品感兴趣

  酵母双杂交服务   [供应商:天津赛尔生物技术有限公司]
  酵母双杂交文库筛选   [供应商:上海玉华生命科技发展公司]
  蛋白质相互作用- 酵母双杂交技术服务   [供应商:北京蛋白质组研究中心]
  酵母双杂交   [供应商:上海激活生物科技有限公司]
  蛋白质相互作用- 酵母双杂交技术服务   [供应商:北京正旦国际科技有限责任公司]
  酵母双杂交   [供应商:英平生物科技有限公司]
  核体系酵母双杂文库   [供应商:上海欧易生物医学科技有限公司]
  酵母双杂交筛选   [供应商:上海意泓生物科技有限公司]
  酵母双杂交文库筛选 蛋白互作验证服务   [供应商:广州吉赛生物科技有限公司]
  Custom Yeast Two-hybrid Screening Services   [供应商:北京安必奇生物科技有限公司]

ADVERTISEMENT

找不到您所需的产品,发布求购试试?

标题:*
描述:
姓名:*
Email:*
单位:*
电话:*
地址:*
邮编:
资料: 需要 不需要
报价: 需要 不需要