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透射电镜(TEM)

透射电镜(TEM)

商家询价

产品名称: 透射电镜(TEM)

英文名称: Transmission Electron Microscope

产品编号: AX-S008

产品价格: 询价

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更新时间: 2024-03-07T11:00:53

使用范围: null

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概念

透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构,这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分辨率

原理

透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)是利用阴极发射的电子,通过阳极中央的微孔形成的电子束穿透样品获得样品的电子信号,经物镜、中间镜和投影镜等多级电子放大至数百至数千万倍,最后成像在荧光屏上便可即时观察,或是投射到照相底片感光片上作为永久记录。目前TEM的分辨力可达0.2 nm。
由于标本必须置于高真空中进行电镜观察,所以电镜观察的生物标本必须特殊制备,不能含水,离体的生物标本要迅速加以固定,以防产生结构改变。另外,电子的穿透力很弱,这就需要把样品制成50 nm~100 nm厚的超薄切片(一个细胞切成100~200片)。为了使柔软的生物组织能够制成这样薄的切片,并使切片耐受高真空和电子轰击,所以在切片前要进行包埋。超薄切片技术是透射电镜观察成功的关键。

实验流程

取材及戊二醛固定漂洗锇酸固定漂洗丙酮梯度脱水渗透包埋切片双染色电镜观察及拍照

实验结果

注意事项

一、 取材

1、 快:实验标本在动物麻醉或处死后1~2分钟内取材、固定完毕;临床活检标本力争组织离体后1分钟内固定。固定液为预冷的2.5%缓冲戊二醛固定液。

2、 小:电镜标本的标准大小为1mm3。取材时,可先取稍大组织,经稍许时间的预固定后,再改小。

3、 利:切割组织时,需用锋利的手术刀片、双面刀片划取,避免揉割、牵拉和挤压组织,防止机械损伤。禁止使用剪刀剪切。

4、 净:取材所用器皿,应事先清洗干净并烘干。

5、 冷:取材可在常温下进行。如有条件最好在4℃低温下操作,以减少组织自溶。所用器械、容器及固定液均应预冷。

6、 所取标本做好标记:瓶签上注明组别、编号等。

7、 取材部位应准确:根据观察内容和实验目的,精准取材,如肿瘤取材时,应确保取到肿瘤实质,避免取肿瘤间质或出血、坏死部位。

二、 固定

预固定:2.5%缓冲戊二醛固定液,用量应为10~20倍于组织块的体积,4℃固定至少30min以上。

取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次,每次10min。

后固定:1%锇酸固定,肾脏固定4min,其他组织固定1h。

取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次,每次10min。

三、 培养细胞的取材和固定细胞样本做透射电镜处理办法与保存条件
1.常规收集帖壁和悬浮细胞,置离心管中离心,800~1000r/min,10min。
2.用0.01mol/L PBS 5ml重悬细胞。
3.将细胞悬液吸入有琼脂空槽的离心管中。
4.离心,2000r/min,15~20min,使细胞成团。
5.小心吸去上清,加入2.5%戊二醛固定液固定细胞团,以免细胞团散开。
6.取出离心管内的琼脂,仔细切下尖槽内含有细胞团的琼脂块。
7.将含细胞的团琼脂块投入含戊二醛固定液的小瓶中,4℃(可长期)保存。
8.用0.1mol/L PBS缓冲液1次。
9.1%锇酸后固定30~60min。