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透射电镜(TEM)武汉傲星生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:透射电镜(TEM)
服务类别:免疫学服务 - 病理学服务
价格:询价
允许参观:允许参观
所在区域:湖北.武汉
更新时间:2022/6/6 18:10:00
浏览人数:55
诚信指数:5点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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供应商联系卡

武汉傲星生物科技有限公司
地址:
武汉东湖新技术开发区光谷大道70号B-1栋(原5栋)2楼S02号
邮编:
/
电话:
18062054798
传真:
/
联系人:
杨雨
所在区域:
湖北·武汉
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

概念

透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构,这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构,就必须选择波长更短的光源,以提高显微镜的分辨率

原理

透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)是利用阴极发射的电子,通过阳极中央的微孔形成的电子束穿透样品获得样品的电子信号,经物镜、中间镜和投影镜等多级电子放大至数百至数千万倍,最后成像在荧光屏上便可即时观察,或是投射到照相底片感光片上作为永久记录。目前TEM的分辨力可达0.2 nm。
由于标本必须置于高真空中进行电镜观察,所以电镜观察的生物标本必须特殊制备,不能含水,离体的生物标本要迅速加以固定,以防产生结构改变。另外,电子的穿透力很弱,这就需要把样品制成50 nm~100 nm厚的超薄切片(一个细胞切成100~200片)。为了使柔软的生物组织能够制成这样薄的切片,并使切片耐受高真空和电子轰击,所以在切片前要进行包埋。超薄切片技术是透射电镜观察成功的关键。

实验流程

取材及戊二醛固定漂洗锇酸固定漂洗丙***梯度脱水渗透包埋切片双染色电镜观察及拍照

实验结果

 

注意事项

一、 取材

1、 快:实验标本在动物麻醉或处死后1~2分钟内取材、固定完毕;临床活检标本力争组织离体后1分钟内固定。固定液为预冷的2.5%缓冲戊二醛固定液。

2、 小:电镜标本的标准大小为1mm3。取材时,可先取稍大组织,经稍许时间的预固定后,再改小。

3、 利:切割组织时,需用锋利的手术刀片、双面刀片划取,避免揉割、牵拉和挤压组织,防止机械损伤。禁止使用剪刀剪切。

4、 净:取材所用器皿,应事先清洗干净并烘干。

5、 冷:取材可在常温下进行。如有条件最好在4℃低温下操作,以减少组织自溶。所用器械、容器及固定液均应预冷。

6、 所取标本做好标记:瓶签上注明组别、编号等。

7、 取材部位应准确:根据观察内容和实验目的,精准取材,如肿瘤取材时,应确保取到肿瘤实质,避免取肿瘤间质或出血、坏死部位。

 

二、 固定

预固定:2.5%缓冲戊二醛固定液,用量应为10~20倍于组织块的体积,4℃固定至少30min以上。

取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次,每次10min。

后固定:1%锇酸固定,肾脏固定4min,其他组织固定1h。

取适量0.1mol/L PBS缓冲液清洗3次,每次10min。

 

 

 

三、 培养细胞的取材和固定细胞样本做透射电镜处理办法与保存条件
1.常规收集帖壁和悬浮细胞,置离心管中离心,800~1000r/min,10min。
2.用0.01mol/L PBS 5ml重悬细胞。
3.将细胞悬液吸入有琼脂空槽的离心管中。
4.离心,2000r/min,15~20min,使细胞成团。
5.小心吸去上清,加入2.5%戊二醛固定液固定细胞团,以免细胞团散开。
6.取出离心管内的琼脂,仔细切下尖槽内含有细胞团的琼脂块。
7.将含细胞的团琼脂块投入含戊二醛固定液的小瓶中,4℃(可长期)保存。
8.用0.1mol/L PBS缓冲液1次。
9.1%锇酸后固定30~60min。

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