人源肿瘤组织模型中人鼠细胞的比例苏州琪霖智检细胞生物技术有限公司

技术服务详细描述

CDX模型、类器官/PDOX、动物模型等在肿瘤发生、发展、转移等基础研究以及药物研发和治疗上扮演着至关重要的角色。

    人源肿瘤细胞系异种移植(cell derived  xenograft,CDX）是指将肿瘤细胞株，通过皮下、静脉或者原位的方式接种到动物体内、形成皮下瘤或者原位瘤模型。CDX具有实验周期短、建模成功率高、试验费用相对较低等优点，但是无法保持肿瘤组织的异质性。

    肿瘤类器官（patient-derived organoids,PDOs）是用取自患病者体内原发性肿瘤，在实验室中培养出一微型的3D肿瘤细胞模型，其在组织病理学、生物标志物与遗传特征，药理功能水平上保留了大部分原代肿瘤的特征、具有较好的临床相关性

    类器官移植瘤小鼠模型(patient-derived orthotopic xenograft, PDOX)是将类器官移植到免疫缺陷鼠而建立的人源异种移植模型。PDOX在保留了类器官优点的同时，可提供体内药理测试

    人源肿瘤组织来源移植瘤模型 (patientl derived  xenograft,PDX）模型是将肿瘤组织以组织的形势移植至NSG小鼠体内，从而很好的保持了肿瘤的异质性

人源肿瘤异种移植模型PDX、类器官移植瘤PDOX、细胞株移植瘤模型CDX中人鼠细胞含量比例检测，可以参考“小鼠源细胞STR鉴定”

小鼠源STR鉴定采用小鼠基因分型试剂盒（Mouse STR v3.0）实现了建立小鼠细胞株分型图谱，准确的数据与数据库进行比对、确定细胞株身份的同时，也可确认是否存在人鼠细胞株的相对比例

提供样本类型：

细胞，细胞数量 ≥ 10⁶，低温运输；

DNA，浓度≥20ng/ul,体积≥20ul，低温运输；

组织，组织要大于芝麻粒大小细胞大于等于10⁶，低温运输

小鼠细胞STR鉴定试验流程：

STR自动化分型技术主要步骤：多色荧光标记STR复合扩增，扩增产物自动毛细管电泳结合激光诱导的荧光检测，自动数据采集并分型。

1、样本提供：细胞株细胞10⁵-10⁶个；组织样本（至少芝麻粒大小，加冰袋运输）；

2、取适量检材用Chelex100 提取DNA；

3、采用小鼠基因分型试剂盒（Mouse STR v3.0）对18-3、4-2、6-7、19-2、1-2、7-1、8-1、1-1、3-2、2-1、15-3和6-4等20个位点进行复合扩增（包括TH01、D5S818人源STR位点）；

4、使用ABI 3130XL型遗传分析仪上对扩增产物进行检测；

5、使用GeneMapper IDX软件(Applied Biosystems)对检测结果进行分析，并与ATCC数据库进行比对。

6、审核实验报告，提供实验报告给委托人或者企业单位。

二、数据对比详情（以样本MC-18为例）：

1、本检测体系的小鼠细胞STR检测位点参考:Interlaboratory study to validate a STR profiling method for intraspecies identification of mouse cell lines. （June 20,2019）PLoS ONE

细胞mc-18的STR分型结果

2、图谱

有效峰为真实的PCR条带;小峰和非特异性条带在计算中忽略不计

①该株细胞DNA进行小鼠细胞STR分型结果显示，分型结果良好，1-1和17-2出现三等位基因现象，TH01、D5S818人源STR位点未见特异扩增峰。

②该株细胞为单一来源小鼠细胞，且没有人源细胞污染。

STR分型图谱说明：

（1）绿色横条为对应的STR基因座名称；

（2）各STR基因座位置的对应的灰色条带为群体遗传学分析统计的不同等位基因的标准品对应的片段长度；

（3）横坐标为基因片段长度值范围：图谱显示范围一般为70b p-500bp；

（4）纵坐标为STR基因片段的信号强度，峰值越高表示当前检测时的样本相对浓度越高，

（5）峰面积越高表示当前检测的细胞相对含量越高，用小鼠的str位点与人源STR位点TH01、D5S818的相对的面积比值就出来了。