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甲基化检测分析服务上海赛恒生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:甲基化检测分析服务
服务类别:分子生物学服务 - 其它
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2022/8/24 19:14:00
浏览人数:513
诚信指数:5点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

供应商联系卡

上海赛恒生物科技有限公司
地址:
上海市闵行区光华路248号漕河泾光华园2号楼1101
邮编:
201108
电话:
400-800-5152
传真:
15021046541
联系人:
王先生
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

主要技术原理

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧***被转化为尿嘧***,而发生甲基化的胞嘧***不变。根据某一待测位点或者调查的某一区域序列设计引物进行PCR扩增,通过PCR电泳、测序、荧光定量及质谱等方法对扩增产物进行检测,根据检测结果分析基因组甲基化的情况。

服务特点

精确度高,能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态

主要服务方案

1. 亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)

实验原理:

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未发生甲基化的胞嘧***被转化为尿嘧***,而甲基化的胞嘧***不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化。根据测序方式不同,又分为以下几种:

a. BSP直接测序法:对于BSP引物扩增产物直接进行测序;

b. BSP克隆测序法:将PCR产物克隆,之后提取质粒进行测序,此方法成功率高、检测方便,适合常规数量样本的特定靶标区域甲基化分析,是国际通用的甲基化分析金标准;

c. BSP高通量测序法:可以进行目标片段甲基化水平分析,也可进行全基因组甲基化水平分析。

技术特点:准确度高、能给甲基化位点精确定位、可重复性高

实验流程:

(1)BSP引物设计:针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计(一般扩增产物不超过300bp)

(2)亚硫酸氢盐处理基因组DNA:提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐的转化

(3)PCR扩增目的片段:BSP引物扩增感兴趣的区域

(4)克隆到载体:将PCR产物纯化后连接到T载体上

(5)克隆测序:挑取阳性*斑,提取质粒并测序

(6)序列分析:对测序的结果进行比对和甲基化分析(一般10个克隆子)

2. 荧光定量法(Methylight)

此方法利用TaqMan 探针和PCR引物来区分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亚硫酸氢盐处理DNA片段,针对甲基化和未甲基化序列各设计一个探针,用不同的荧光标记,随后开展实时定量PCR。如果探针与DNA杂交则释放出荧光信号,根据荧光信号的强度比值计算甲基化水平。

技术特点

检测通量高。早期由于没有其它高通量的检测方式,用荧光定量法针对较多的样品进行检测时,是一个比较好的检测方案。但是该方法问题比较多,待检测的区域只有一个甲基化位点时,探针的区分度不高。同时,为了达到比较好的区分效果,一般采用MGB探针,探针成本较高。如果只是检测少量样品,探针分摊成本很高。现在针对较多的样品待检测时,通常都会采用高通量测序法,快速、准确,成本可控。 

客户提供

 1 要调查的基因名称、种属

 2 要调查的甲基化区域或位点

 3 足量的科研样本,保证样本质量,提供清晰样品编号

送样要求

 1 样品要求:细胞≥105个;基因组DNA ≥5ug                      

 2 所有样品建议干冰或冰袋运输,保证样品质量

检测周期

常规检测任务2-4周内完成,具体时间根据样本量和检测的基因数而定。

下单流程

直接订购:将需求内容给直接发送到gene@saihengbio.com,或致电:400-800-5152

报告内容

提供完整实验报告、电泳图、测序结果、序列比对结果、甲基化点状图、柱状图以及初步分析数据等。

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