技术服务信息
服务名称：甲基化检测分析服务
服务类别：分子生物学服务
- 其它
价格：询价
允许参观：允许参与实验
所在区域：上海.上海
更新时间：2022/8/24 19:14:00
浏览人数：575
服务商：上海赛恒生物科技有限公司
诚信指数：7点
了解更多：进入公司展台
使用范围：仅限科研使用，不能应用于临床
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技术服务详细描述
主要技术原理
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，则未发生甲基化的胞嘧***被转化为尿嘧***，而发生甲基化的胞嘧***不变。根据某一待测位点或者调查的某一区域序列设计引物进行PCR扩增，通过PCR电泳、测序、荧光定量及质谱等方法对扩增产物进行检测，根据检测结果分析基因组甲基化的情况。
服务特点
精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态
主要服务方案
1. 亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite Sequencing PCR，BSP）
实验原理：
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，未发生甲基化的胞嘧***被转化为尿嘧***，而甲基化的胞嘧***不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增，对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化。根据测序方式不同，又分为以下几种：
a. BSP直接测序法：对于BSP引物扩增产物直接进行测序；
b. BSP克隆测序法：将PCR产物克隆，之后提取质粒进行测序，此方法成功率高、检测方便，适合常规数量样本的特定靶标区域甲基化分析，是国际通用的甲基化分析金标准；
c. BSP高通量测序法：可以进行目标片段甲基化水平分析，也可进行全基因组甲基化水平分析。
技术特点：准确度高、能给甲基化位点精确定位、可重复性高
实验流程：
（1）BSP引物设计：针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计（一般扩增产物不超过300bp）
（2）亚硫酸氢盐处理基因组DNA：提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐的转化
（3）PCR扩增目的片段：BSP引物扩增感兴趣的区域
（4）克隆到载体：将PCR产物纯化后连接到T载体上
（5）克隆测序：挑取阳性*斑，提取质粒并测序
（6）序列分析：对测序的结果进行比对和甲基化分析（一般10个克隆子）
2. 荧光定量法（Methylight）
此方法利用TaqMan 探针和PCR引物来区分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亚硫酸氢盐处理DNA片段，针对甲基化和未甲基化序列各设计一个探针，用不同的荧光标记，随后开展实时定量PCR。如果探针与DNA杂交则释放出荧光信号，根据荧光信号的强度比值计算甲基化水平。
技术特点
检测通量高。早期由于没有其它高通量的检测方式，用荧光定量法针对较多的样品进行检测时，是一个比较好的检测方案。但是该方法问题比较多，待检测的区域只有一个甲基化位点时，探针的区分度不高。同时，为了达到比较好的区分效果，一般采用MGB探针，探针成本较高。如果只是检测少量样品，探针分摊成本很高。现在针对较多的样品待检测时，通常都会采用高通量测序法，快速、准确，成本可控。
客户提供
1 要调查的基因名称、种属
2 要调查的甲基化区域或位点
3 足量的科研样本，保证样本质量，提供清晰样品编号
送样要求
1 样品要求：细胞≥105个；基因组DNA ≥5ug
2 所有样品建议干冰或冰袋运输，保证样品质量
检测周期
常规检测任务2－4周内完成，具体时间根据样本量和检测的基因数而定。
下单流程
直接订购：将需求内容给直接发送到gene@saihengbio.com，或致电：400-800-5152
报告内容
提供完整实验报告、电泳图、测序结果、序列比对结果、甲基化点状图、柱状图以及初步分析数据等。
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