供应solexa测序实验服务上海明烨生物科技有限公司

技术服务详细描述

solexa实验方案                 
＊ 实验设计：  

      明烨生物科技作为专业的生物技术服务公司，我们在实验设计方面积累了丰富的经验，可以免费为客户提供专业的、个性化的实验设计方案. 

＊ 实验步骤: 

      对客户提供的mRNA(或总RNA)进行样品检测，样品检测合格后采取如下技术路线进行测序： 
      基因表达方法采用Illumina Digital Gene Expression试剂盒。选取起始1～2μg总RNA，利用OligodT的beads富集总RNA样本中mRNA，并逆转录为双链cDNA，采用4碱基识别酶DpnII酶切双链cDNA，链接Illumina adapter1，利用MmeI酶切3’端20碱基，并在3’端链接Illumina adapter2。 
    再加入Primer GX1和Primer GX2, 进行15个循环的PCR扩增（10 seconds at 98°C， 30 seconds at 60°C， 15 seconds at 72°C ，10 minutes at 72°C）。扩增后样本通过6% TBE PAGE胶回收85碱基条带，纯化后通过Illumina基因表达测序法测序。 

＊ 技术参数： 

每个通道，测序片段35个bp。 
保证测量500万Read。 
简单的数据分析： 
1）、Reads数目统计及频率分布图，将Reads比对到参考基因、基因组。 
2）、Reads在所有已知的参考基因中的位置分布情况。 
3）、不同长度的所有已知的miRNA基因被Reads覆盖的情况。 
进一步的数据分析参见详细数据分析方案。