慢病毒(Lentivirus)介导的siRNA活体实验用病毒转染服务上海吉玛制药技术有限公司

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技术服务信息

服务名称:慢病毒(Lentivirus)介导的siRNA活体实验用病毒转染服务
服务类别:分子生物学服务 - 病毒转染系统服务
价格:询价
允许参观:允许参观
所在区域:上海.上海
更新时间:2018/5/8 18:46:00
浏览人数:9723
诚信指数:1029点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海吉玛制药技术有限公司
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浦东张江哈雷路1011号602
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201203
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传真:
51320295
联系人:
杨丽
所在区域:
上海·上海
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公司展台:

技术服务详细描述

Lentivirus 载体的技术特点

  • 大大提高对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分裂的细胞等转导效率
  • 快速获得高水平的表达
  • 目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加
  • 将免疫反应降到最低
  • 能够插入大的片段(~7.5 kb)
  • 能够应用于干细胞研究
  • 最低的细胞毒性

 

本公司使用的慢病毒表达系统,它由三部分组成:

  • 慢病毒表达载体
  • 慢病毒包装质粒
  • 可产生假病毒颗粒的细胞系

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

服务流程

对于活体 RNAi实验模型,吉玛公司可以为您生产高质量的病毒液,服务流程如下:

  • 根据目的基因相关信息(序列,序列号等),利用高效的设计软件,设计 siRNA序列,针对每条目的基因,我们设计3条siRNA序列,其中1条序列为阴性对照组;
  • 根据设计好的 siRNA序列,设计,合成两条互补的短片段的DNA;
  • 对合成好的 DNA片段进行稀释,退火,连接到线形化处理过的载体,转化,涂平板,过夜培养;
  • 通过 PCR的方法筛选阳性菌落,进行测序,分析测序结果;
  • 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒;
  • 利用构建好的质粒做转染实验, 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因,筛选出一条最有效的siRNA序列;
  • 筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;
  • 浓缩、纯化病毒液,测定滴度;

提供高质量的病毒液给客户(对于活体实验,我们提供的病毒基本单位为 1×108ifu ,这个单位为一只小鼠一次实验的平均用量)

基于慢病毒系统的 RNAi沉默效果

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