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慢病毒包装整体技术服务

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产品名称: 慢病毒包装整体技术服务

英文名称: 慢病毒包装整体技术服务

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百恩维生物科技有限公司
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慢病毒技术服务

慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛,可以有效感染分裂期和静止期细胞,长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

百恩维生物(Biowit)提供的慢病毒:

百恩维生物采用第三代 4质粒慢病毒包装系统,生物安全性更高; 

采用VSV-G包膜,宿主范围更广; 

产生的慢病毒滴度高,可达108~ 1010TU/mL; 

各种慢病毒穿梭载体可供选择:过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等; 

可带有荧光报告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和药筛标记基因(Puromycin、Neomycin、Hygromycin等),有多种启动子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供选择; 

3~4周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。

 

Biowit各种慢病毒表达载体图谱:(各列举一个载体,如您想了解更多,可以跟我们的技术服务人员联系)

3个包装质粒图谱:

 

Biowit慢病毒包装技术路


 



 

服务流程:

 

您只需给我们提供详细的基因信息,选定您项目所需的慢病毒载体,我们就能为您生产出符合您要求的带有目的基因的慢病毒。

另外百恩维生物经过鉴定与质量控制:载体测序鉴定、荧光法测定滴度、感染活性测定等,保证给您提供的病毒正确可靠。

Biowit部分慢病毒感染细胞实例:

      

 

慢病毒概述

     慢病毒( Lentivirus)属于逆转录病毒科(Retroviridae),为RNA病毒,如人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于对HIV-1的研究最广泛最深入,对其生物学特性最为了解,因此HIV-1来源的慢病毒载体已成为其中的代表。

    HIV-1为双链RNA病毒,共有9个基因,如图1所示。gag、pol、env3个基因编码病毒的基本结构,tat、rev为调节基因,vif、vpr、vpu、nef 4个为辅助基因。其中,gag基因编码病毒的核心蛋白,包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白;pol基因编码病毒复制所需的酶,如反转录酶、整合酶、蛋白酶,env基因编码病毒的包膜糖蛋白,决定病毒感染宿主的靶向性。rev编码的蛋白调节gag、pol、env的表达水平,tat编码的蛋白参与RNA转录的控制。4个辅助基因编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列(LTR),内含复制所需的顺式作用元件,如包装信号元件Ψ。

第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表,该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。包装质粒是HIV-1前病毒基因组5’端LTR由巨细胞病毒早期启动子取代,3’LTR由SV40 polyA序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上,一个表达gagpol,另一个表达env。载体质粒携带了5’端LTR,和全部5’端非翻译区域,另外还带有rev应答元件(RRE)。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用来代替了原病毒的env基因。

第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进,在包装质粒中删除了HIV的所有辅助基因(vif、vpr、vpunef基因)。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力,同时增加了载体的安全性。

第三代慢病毒载体系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。将rev基因单独放在一个包装质粒上。同时又增加了两个安全特性:一是构建自身失活的慢病毒载体,即删除了U3区的3′LTR,使载体失去HIV-1增强子及启动子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA;二是去除了tat基因,用异源启动子序列代替,这样原始的HIV-1基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3个(gag、pol和rev)。因此第三代慢病毒载体系统更加安全。

百恩维生物用的就是第三代四质粒包装系统,安全可靠。

慢病毒优点

1 宿主范围广  包装病毒时用VSV-G基因代替了原病毒的env基因,宿主范围更广,如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。 

2 感染能力强  慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,能感染绝大多数细胞,对一些难于转染的细胞,比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞有较好的感染效率。    3 具有整合能力  慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达,因此可用于构建稳定表达目的蛋白/RNAi的细胞株,也可以用于制备转基因动物。 

 

 

相关技术服务:

稳转细胞株构建

非整合型慢病毒包装

腺病毒包装

腺相关病毒包装

杆状病毒包装