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细胞转移方向实验上海吉凯基因医学科技股份有限公司

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:细胞转移方向实验
服务类别:细胞生物学服务 - 筛选/发育服务
价格:欢迎来电洽询
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2021/9/23 17:23:00
浏览人数:4781
诚信指数:1052点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海吉凯基因医学科技股份有限公司
地址:
上海市浦东新区张江高科技园区爱迪生路332号
邮编:
201203
电话:
4006210302
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上海·上海
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技术服务详细描述

 


细胞转移方向实验


服务流程




服务说明





      细胞迁移运动的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵袭转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,在肿瘤转移过程中的某些阶段,肿瘤细胞表现出较强的运动能力,如肿瘤细胞从原发瘤灶分离,进而侵入到邻近组织及再穿过血管壁进入血液循环和穿出血管壁进入继发部位等,因而细胞迁移运动能力是生物医学研究中重要的研究方法。


      体外检测肿瘤细胞主动移行能力的功能学实验包括celigo划痕实验、细胞转移(transwell)、细胞侵袭(transwell ECM)实验,还可以采用WB方法检测EMT分子marker来反映细胞的转移、侵袭能力。

 

celigo划痕愈合实验

      在体外培养的单层细胞上,划痕致伤,然后以低浓度血清(0.5%)培养基培养,检测细胞一定时间后划痕愈合情况,从而反映细胞转移能力。


技术原理


      上皮细胞,癌细胞,角质细胞,在生理状态下,形成单层或者复层上皮,当病理状态下,比如创伤愈合,细胞迁移的时候,以侧向运动为主,划痕实验很好的模拟了这种运动形式。细胞划痕是测定肿瘤细胞的运动特性的方法之一,借鉴体外细胞致伤愈合实验模型,在体外培养的单层细胞上,划痕致伤,然后通过药物或者干扰手段观察肿瘤细胞的迁移能力。

吉凯基因提供的划痕实验,还可在HCS仪器中进行(比如Cellomics仪器),通过一次划痕实验,检测几组、甚至几十组经不同条件处理的细胞划痕愈伤能力是否有差异,从而筛选出阳性实验组。


吉凯实验实例


      针对目的基因的shRNA靶点病毒或对照病毒感染HepG2细胞,四天后,在96孔板中铺细胞50000细胞,次日待细胞贴壁后用枪头均匀划伤,用PBS洗尽划痕时残余细胞,以无血清培养基培养,检测细胞不同时间的划痕愈合情况,从而筛选出运动细胞发生变化的实验组。

 

 


对照组:感染阴性对照慢病毒细胞;
处理组:感染针对目的基因的shRNA慢病毒细胞

结论:降低目的基因的表达后,细胞运动能力减弱。

 


Transwell细胞转移实验

      Transwell小室上室为无血清细胞悬液,下室为含血清的培养基,利用细胞对血清中的某些细胞因子的趋向性促使细胞向下室转移,计数进入下室的细胞量可反映细胞转移能力。


技术原理


      细胞运动性的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵袭转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,在肿瘤转移过程中的某些阶段,肿瘤细胞表现出较强的运动能力,如肿瘤细胞从原发瘤灶分离,进而侵入到邻近组织及再穿过血管壁进入血液循环和穿出血管壁进入继发部位等,因而细胞运动性的研究在弄清肿瘤细胞侵袭和转移的机制上有重要地位。

肿瘤运动性的研究方法主要是体外检测肿瘤细胞主动移行的能力,一般有划痕实验、诱导转移(Transwell)实验等。


      吉凯基因提供的Transwell实验,使用Corning转移实验试剂盒,其transwell小室是由24孔组织培养板和12孔细胞培养嵌入物组成,嵌入物(即小室)底层含有8 μm孔径大小的聚碳酸酯膜。实验时,上室为无血清细胞悬液,下室为含血清的培养基,血清中某些成分如一些细胞因子,对细胞生长来说是必不可少,因此细胞对这些因子具有趋向性,利用细胞的这种趋性促使细胞向下室转移,细胞发生迁移后会黏附于聚碳酸酯膜底部,以聚碳酸酯膜底部细胞数量来显示细胞转移能力,不同细胞在此会显示不同的运动转移能力。


吉凯应用实例


       调控不同基因的慢病毒感染目的细胞后,根据感染后的细胞在一定时间内穿过transwell小室的细胞量,对细胞一定时间内的迁移率进行统计,通过shCtrl与各实验组迁移率比较后进行统计,筛选转移相关功能基因。




TranswellECM细胞侵袭实验

       Transwell小室间增加基质胶(ECM),细胞进入下室需要先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解。计数进入下室的细胞量可反映细胞的侵袭能力。

 

技术原理

       细胞运动性的研究,尤其是在肿瘤细胞的侵袭转移中应用很广泛。肿瘤转移是恶性肿瘤生物学特征之一,在肿瘤转移过程中的某些阶段,肿瘤细胞表现出较强的运动能力,如肿瘤细胞从原发瘤灶分离,进而侵入到邻近组织及再穿过血管壁进入血液循环和穿出血管壁进入继发部位等,因而细胞运动性的研究在弄清肿瘤细胞侵袭和转移的机制上有重要地位。

肿瘤运动性的研究方法主要是体外检测肿瘤细胞主动移行的能力,一般有划痕实验、诱导转移(Transwell)实验等。

吉凯基因提供的Transwell实验,使用Corning转移实验试剂盒,其transwell小室是由24孔组织培养板和12孔细胞培养嵌入物组成,嵌入物(即小室)底层含有8 μm孔径大小的聚碳酸酯膜。实验时,上室为无血清细胞悬液,下室为含血清的培养基,血清中某些成分如一些细胞因子,对细胞生长来说是必不可少,因此细胞对这些因子具有趋向性,利用细胞的这种趋性促使细胞向下室转移,细胞发生迁移后会黏附于聚碳酸酯膜底部,以聚碳酸酯膜底部细胞数量来显示细胞转移能力,不同细胞在此会显示不同的运动转移能力。

 

吉凯应用实例

      用待研基因shRNA慢病毒感染MDA-MB-231细胞,3天后收集细胞并接种至Transwell小室中,细胞在Transwell小室中孵育18小时后,取出小室,染色并拍照计数,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,侵袭的MDA-MB-231细胞显著减少,表明MDA-MB-231细胞侵袭能力显著下降,待研基因与MDA-MB-231细胞侵袭显著相关。

 

EMT分子marker检测

通过Western Blot的方法检测细胞中EMT marker蛋白表达量,判断EMT过程的变化,从而反映细胞转移能力和侵袭能力变化。 


技术原理

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