单核苷酸多态性分析(SNP)检测服务上海迪奥生物科技有限公司

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技术服务信息

服务名称:单核苷酸多态性分析(SNP)检测服务
服务类别:分子生物学服务 - SNP检测服务
价格:询价
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2018/3/20 9:42:00
浏览人数:16964
诚信指数:534点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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技术服务详细描述

基因单核苷酸多态性(SNP)突变检测服务 
一、 定义: 
       1)一种遗传标记,包括单个碱基的缺失和插入,更多情况是单个碱基的置换。
       2)通常情况下是一种二等位基因的变异,多为转换,即一种嘧***碱基换为另一种嘧***碱基,或一种 嘌呤碱基换为另一种嘌呤碱基,转换与颠换之比为2:1。 
       3)SNP在CG序列上出现最为频繁,而且多是C→T,因为CG中C即胞嘧***常为甲基化的,自发脱氨 后即变为胸腺嘧***。 
       4)人类基因组SNP位点的数量:目前的估计不完全相同,有人估计每400bp就有一个碱基不同;另一些人则估计变异频率在0.5‰--10‰。如果假定1/1000的碱基是多态,那么人类30亿碱基中就 有300万SNP位点。 
       5)SNP的分布不均匀,非转录序列中要多于转录序列,绝大多数位于蛋白的非编码区。 
       6)重要性:虽然SNP 不及RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)和短串联重复序列 STR标记变异程度高,但由于数量巨大,分布频密,因此就整体而言,其多态性要高得多。 
       7)检测方便:大多为二态,便于自动化批量检测。 
二、 方法 DNA序列分析(DNA sequencing) 应用各种突变检测技术检测到的基因突变,最后都需用序列分析才能确定突变类型及突变位置,其效率可以达到100%
主要有两种方法:
       1,测序法:现在的测序方法已与经典的方法有了很大的不同,其基本原理虽仍是双脱氧终止法,但自动化程度大为提高,操作更简便,测序时间也大大缩短。随着PCR技术与测序联合使用,不需经过M13亚克隆步骤,故称为直接测序法(direct sequencing,DS)。
       2,探针法:实验原理:探针只与模板特异性地结合,其结合位点在两条引物之间。探针的5′端标记有报告基团(Reporter, R),如FAM、VIC等,3′端标记有荧光淬灭基团(Quencher, Q),如TAMRA等。当探针完整的时候,报告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收,仪器检测不到信号。随着PCR的进行,Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针,其5′→3′外切核酸酶活性就会将探针切断,报告基团远离淬灭基团,其能量不能被吸收,即产生荧光信号。在探针的5’端使用不同的Report荧光基团,单一PCR中可以检测到多个探针的杂交与相应荧光。只有与模板完全匹配的TaqMan探针在与等位基因发生特异性杂交后,利用Taq酶的5’外切酶活性作用使得探针的5’Report荧光能够被检测。 
实验步骤如下: 
(1)客户收集标本(血液或组织等标本); 
(2)确定基因突变SNP位点, 设计合成特异PCR扩增普通引物及探针,并在NCBI网站做BLAST; 
(3)进行PCR扩增,通过SNP分型获得实验报告; 
(4)分析报告,给出实验结果; 

本公司提供探针法SNP技术服务

1)snp原理

2)SNP散点图

3)纯合子扩增曲线

4)杂合子扩增曲线

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