MTT北京爱思益普生物科技股份有限公司

技术服务信息

服务名称:MTT
服务类别:新药研发外包服务 - 临床前筛选服务
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2017/4/26 12:00:00
浏览人数:422
诚信指数:295点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京爱思益普生物科技股份有限公司
地址:
北京亦庄经济技术开发区经海三路35号院德上科技园内4幢3层
邮编:
100176
电话:
010-67809840,18611172849
传真:
010-67809840
联系人:
李英骥
所在区域:
北京·北京
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

 MTT(四唑蓝)比色法是是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT法广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验等研究。

 

实验方法:

        1. 收集对数生长期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入50μl铺板使待测细胞调密度 5000- 7500细胞孔。

        2.  5%CO237℃孵育过夜,倒去培养液,加入浓度梯度的药物。每个药物设9个浓度梯度(30μmol/L,10μmol/L,3.33μmol/L,1.11μmol/L,0.37μmol/L,0.123μmol/L, 0.041μmol/L, 0.0137μmol/L, 0μmol/L),每孔50μl,每个浓度设2个重复,同时设DMSO和阳性药物(Taxol/Gemcitabine)对照组。

       3.  5%CO237℃孵育72小时。

       4. 倒掉含药培养基,每孔加入100μl 用无血清培养基配制的终浓度1mg/ml MTT 溶液,继续培养4h

       5.  每孔加入溶解液25%SDS (Sodium Dodecyl Sulfate十二烷基硫酸钠)+50%DMF 100μl37℃孵育过夜。

       6. synergy 4多功能读板机于OD570nm读取各孔的吸光值。

 

统计学分析

         1.分析软件     ExcelGraphPad Prism 5

        2.  数据分析    

 1)计数资料以均值±标准差表示,结果采用单因素方差分析(ANOVA)。

      2)各种样品的IC50曲线用GraphPad Prism 5软件进行分析生成。

            样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比为:

  (样品孔OD-空白孔OD均值)/(阴性对照孔OD-空白孔OD均值)*100%

  3)样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比进行非线性回归分析,按以下方程进行拟合,得到样品的浓度-效应依赖性曲线。

Y = 1/(1 + 10(log IC50 − X× HillSlope)

                    其中IC 50为抑制肿瘤生长50%的样品浓度。

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