Pyrosequencing甲基化检测服务上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中心

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技术服务信息

服务名称:Pyrosequencing甲基化检测服务
服务类别:分子生物学服务 - DNA测序服务
价格:请咨询021-51320288-8136
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2018/2/6 16:30:00
浏览人数:367
诚信指数:2041点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中心
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技术服务详细描述

 

Pyrosequencing甲基化检测服务

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      焦***酸测序技术(Pyrosequencing)作为一种新的序列分析技术,能够快速地检测甲基化的频率,对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测,为甲基化研究提供了新的途径。上海伯豪为您提供基于QIAGEN公司焦***酸测序平台的服务。


一、焦***酸测序技术原理 

焦***酸测序技术是由4种酶(DNA 聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三***酸腺苷双***酸酶)催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。具体过程如下:

1.仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP)
2.互补的碱基结合在模板上时,会释放出焦***酸基团Pyrophosphate (PPi)
3.PPi在ATP硫酸化酶(ATP Sulfurylase)作用下,合成ATP,ATP作为能量分子,驱动荧光素在荧光素酶(Luciferase)的催化下转化为氧化荧光素,并发出与ATP能量成正比的荧光信号
4.信号被CCD数码相机捕捉,形成峰形PyrogramTM
5.未与模板结合的碱基将被三***酸腺苷双***酸酶(Apyrase)降解
6.加入下一种dNTP

 

 

 

二、焦***酸测序实验流程

 

 

 

三、焦***酸测序在DNA甲基化中的应用

1.基因组整体水平的甲基化检测
2.特异位点的甲基化检测
3.寻找新的甲基化位点

四、焦***酸测序结果展示


五、 案例分析


焦***酸测序检测宫颈癌中UTF1启动子区域甲基化水平

 

研究者利用Illumina HumanMethylation27芯片对9例样本(4例正常,5例宫颈癌)进行全基因组启动子区甲基化扫描,结果显示宫颈癌患者UTF1启动子区域呈现出高的甲基化状态。为了验证芯片筛选的结果,采用焦***酸测序方法首先对这些样本的UTF1启动子区域进行深入分析,结果表明正常宫颈中UTF1启动子区域呈现低甲基化状态,而相同的位点在SCC中呈现高甲基化状态。为了进一步验证,研究者扩大样本量,对47例不同类型的石蜡包埋组织样本及10例白细胞进行焦***酸测序检测,与之前的结论保持一致。结合RNA水平和蛋白水平的实验,研究者最后提出UTF1启动子甲基化状态可以作为宫颈癌诊断的一个重要的分子标志物。


原文:Aberrant Promoter Methylation and Expression of UTF1 during Cervical Carcinogenesi. Plos One. 2012 ,7(8):e42704.

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