AAV相关病毒包装服务

腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）属于微小病毒科( parvovirus)，为无包膜的单链线状 DNA 病毒。AAV 的基因组约 4700bp，包括上下游两个开放读码框架(ORF)，位于分别由 145 个核苷酸组成的 2 个反向末端重复序列(ITR)之间。 由于腺相关病毒具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优点，已被广泛地应用于基础研究和临床试验中，并且腺相关病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

AAV病毒特点

1.安全性高，目前还没有发现AAV对人体致病；每10个人中就有8个人在一生中会感染AAV，而rAAV更是去除了96%的AAV基因组，进一步确保了安全性。目前唯一通过欧盟药监局的基因治疗药物Glybera也是一种rAAV。

2.免疫原性低：当AAV用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时，很少有感染上的细胞之后被免疫系统所清除。这种特性对于动物实验上显然极有帮助。

3.感染谱广：几乎所有处于分裂期和静止期的细胞都可以使用AAV来感染。

4.表达时间长：rAAV可在宿主细胞中形成附加体（episome）存在于细胞核中，在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达5个月以上。

5.扩散性强：rAAV具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性，可以穿透血脑屏障，是最理想的神经元和胶质细胞感染工具。

6.高稳定性：rAAV病毒可使用冰袋运输，并且对氯仿等试剂具有抗性

7.特异性强：rAAV有十数种常用的血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力。

枢密科技采用2套rAAV制备方法：
1.AAV无辅助病毒系统(AAV Helper-Free System)：
该系统利用已经明确与调节AAV复制和表达的腺病毒基因产物，并且将这些基因产物通过转染引进宿主细胞。在AAV Helper-Free System中，生产具感染性的AAV病毒颗粒所需的腺病毒基因产物(例如：E2A，E4和VA RNA基因)大部分由与其他质粒共转染进细胞的pHelper质粒提供，其余的腺病毒基因产物由稳定表达腺病毒E1基因的AAV-293宿主细胞提供。AAV-293细胞是经过改良HEK293腺相关病毒生产能力而衍生出的亚克隆细胞系。由于不再需要活的辅助病毒，AAV Helper-Free System提供一个更安全，更便利的替代逆转录病毒和腺病毒的基因传递系统。
2.新型杆状病毒系统制备rAAV的方法：
该系统可通过穿梭载体灵活装载外源基因的片段，并在细菌内高效重组到杆状病毒基因组上。再将抽提出的重组杆状病毒基因组DNA经转染Sf9昆虫细胞，产生有感染活性的重组杆状病毒。然后，利用重组杆状病毒（BEV）感染悬浮培养的Sf9细胞生产rAAV。新型杆状病毒系统灵活性高、通用性强、病毒质量高、产量高，适于大规模放大生产，rAAV纯化后能够达到很高的纯度，生物安全性高。
AAV载体不同血清型

研究发现 AAV 具有多种血清型，各种不同血清型的 AAV 载体的主要区别是衣壳蛋白不同，因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。目前枢密科技提供有12种不同的 AAV 血清型可供客户选择，建议客户针对不同组织器官选择相应血清型的 AAV 病毒，见下表。

  12种不同血清型AAV对各组织器官细胞的亲和性 

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