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细胞增殖方向实验上海吉凯基因医学科技股份有限公司

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技术服务信息

服务名称:细胞增殖方向实验
服务类别:细胞生物学服务 - 筛选/发育服务
价格:欢迎来电洽询
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2021/9/14 16:42:00
浏览人数:921
诚信指数:1051点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海吉凯基因医学科技股份有限公司
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上海市浦东新区张江高科技园区爱迪生路332号
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上海·上海
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技术服务详细描述

 

细胞增殖方向实验


服务流程


 

 


服务说明

 

MTT MTS CCK8

       反映细胞增殖情况;通常连续检测5天,获得细胞增殖曲线;检测细胞增殖最经济常用的方法,MTT只适用于贴壁细胞,MTS/CCK8可用于悬浮细胞。


技术原理

   活细胞特别是增殖期细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT(即黄色噻唑兰)还原成难溶于水的蓝紫色针状Formazan结晶并沉淀在细胞中,且Formazan的形成量与细胞活力成正比,二甲基亚砜(DMSO)能够溶解Formazan结晶,用酶标仪在特定波长处测定其吸收值,即可间接反映细胞增殖情况。MTS及WST–8(CCK-8试剂)都是新型唑类化合物,和MTT一样,同样都能被细胞线粒体中的脱氢酶还原,MTS及WST–8被还原后的Formazan化合物具有高度水溶性,无需再用加DMSO,可直接用酶标仪在特定波长处测定吸收值。


      因还原生成的甲臜物数量与活细胞的数量成正比,MTT、MTS、CCK-8均可用于细胞增殖的检测,目前被广泛应用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤***敏感性测定等。


吉凯应用实例


      为研究某基因是否是某肿瘤细胞增殖相关的关键基因,可将目的基因shRNA慢病毒感染靶细胞,使靶细胞内源表达的目的基因表达下调,随后用MTT进行检测,观察目的基因表达下调后的细胞与对照细胞相比细胞增殖的变化,从而推断结论。


   用待研基因shRNA慢病毒感染A375细胞,3天后收集细胞,按2000/孔的细胞数量接种细胞至96孔板,第二天待细胞贴壁后,开始进行MTT检测,连续检测5天,获得细胞增殖曲线。结果显示,shRNA下调目的基因表达后,细胞增殖显著减缓,表明待研基因与A375细胞增殖显著相关。

BrdU EdU

   可代替胸腺嘧***在DNA合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗BrdU单克隆抗体,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。


技术原理

        溴脱氧尿嘧***核苷(bromodeoxyuridine, BrdU)是DNA前体胸腺嘧***核苷类似物,可竞争性掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧***,利用抗体连接酶或荧光素作为指示系统标记BrdU,当处于旺盛分裂的细胞掺入BrdU后,即可检测出含有BrdU的细胞,并以此判断细胞的数目。固相包被细胞的微孔中加入BrdU抗体,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的BrdU呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过OD值的高低,反映正在合成DNA细胞数的多少,从而反映正处于增殖状态的细胞量。


吉凯应用实例

       用待研基因shRNA慢病毒感染T24细胞,3天后收集细胞接种96孔板,待细胞贴壁后第一天和第四天进行Brdu检测,结果显示,shRNA下调目的基因表达后,细胞增殖显著减缓,表明待研基因与T24细胞增殖显著相关。




上海吉凯基因医学科技股份有限公司

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