生物素标记多肽

在许多蛋白研究领域中，生物素标记肽通常与亲和素结合而被检测或纯化: 免疫印迹（WB）、ELISA、免疫沉淀 (IP)、多肽亲和纯化、免疫组化 (IHC)、细胞表面标记、流式细胞术/荧光激活细胞分类(FACS)。

合生生物提供生物素标记肽合成服务。通常，生物素可被标记在N端或C端(经由Lys)。我们推荐N端标记，其标记的成功率更高，所需时间更短，操作更简洁。

生物素可通过各种不同的linker或spacers与多肽隔离。一般建议引入间隔器如Ahx（一个6碳链接器)让生物素更稳定或更灵活。

合生生物提供N端或C端生物素标记：Biotin (N terminus), Lys(Biotin)(middle), Lys(Biotin)(C terminus)。

带有linker(Ahx)的生物素化: Biotin-Ahx (N terminus), Lys(Ahx-Biotin)(middle), Lys(Ahx-Biotin)(C terminus)。

生物素标记肽的Pull-down实验方案分析

生物素标记肽可与亲和素磁珠共轭以生成树脂，用于肽pulldown试验。先把生物素标记肽上样至Immobilized streptavidin beads (Pierce) 锚定有亲和素的磁珠上，再与细胞裂解液孵育。细胞裂解于1％（v/v）Nonidet P-40, 

150 mM sodium chloride, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, protease inhibitors (Complete Tablets, Roche AppliedScience), 加入 1 mM sodium orthovanadate作为磷酸酶抑制剂。等量的蛋白质分别与被锚定的多肽在4℃孵育6小时。经过大量洗涤，在SDS样品buffer中煮沸，结合蛋白可从被锚定的多肽洗脱下来，或者，用50 mM dithiothreitol将多肽与蛋白复合物从磁珠中断开。将来自活性肽和对照目标肽pull-downs的洗脱液合并，以作进一

步的分析。