甲基化特异性检测(MSP/qMSP/BSP)上海迪奥生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:甲基化特异性检测(MSP/qMSP/BSP)
服务类别:分子生物学服务 - 其它
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2018/3/20 9:42:00
浏览人数:9878
诚信指数:534点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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技术服务详细描述

 

        

 使用美国AB公司的9700 PCR System为主的多种PCR装置。

 

  一,原理与应用

 

 

甲基化是在DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferase, DNMT)催化作用下, 利用

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧

***嘧***环的五号碳原子上加上甲基的共价修饰过程。DNA甲基化修饰现象广泛存在于

多种有机体中,是最早发现的修饰途径之一,是表观遗传学(Epigenetics)的重要组

成部分。大量研究表明,DNA甲基化不改变DNA的一级结构,但是能引起染色质结构、

DNA 构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而在基因的表达及

其调控、DNA的复制、细胞的生长发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病(如发

育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等)发生过程中发挥重要作用。

    DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧***和少量的N6- 甲基腺嘌呤及7-甲基鸟嘌呤。

在高等生物中,5-甲基胞嘧***多发于CpG二核苷酸序列中,基因组中60%-90%的

CpG是甲基化的。在甲基转移酶(DNMT)的催化作用下,利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)

提供的甲基,使CpG二核苷酸序列中的胞嘧***转变为5-甲基胞嘧***。由于甲基化胞嘧

***极易在进化中丢失,高等真核生物中CpG序列远远低于其理论值,但在基因组的某

些区域中,通常基因的启动子和第一外显子区,CpG序列密度很高,可以达均值

的5倍以上,成为鸟嘌呤和胞嘧***的富集区,形成所谓的CpG。哺乳类基因组中约

存在4万个CpG岛,大多位于转录单元的5’区。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普

遍现象,而启动子CpG 岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种

机制。因此,基因启动子甲基化检测在临床诊断药物敏感性检测等方面具有很高的

应用价值。

 

 

二, 服务项目

1.  BSP分析
2.  Msp分析

3.  QMSP分析

 

 

三, 检测方法

     亚硫酸盐修饰克隆测序法,巢式PCR法,荧光定量PCR法

四, Real Time PCR装置

    使用美国ABI公司的9700 PCR仪和Step-one PLUS System为主的PCR装置。

 

 五, 服务项目说明 

 

 

1, 亚硫酸盐测序法 (bisulfite sequencing PCR, BSP)

        先抽提基因组DNA,再进行亚硫酸盐修饰,甲基化PCR后装克隆,通过最后对PCR产

物进行克隆测序,可以得到目的片段中每个CG位点的甲基化情况,这种方法更加准确,所以

目前BSP法受到更多研究者的青睐!

最后通过对测序结果分析, 可以得到如下数据:

1.  测序序列与目的序列的相似度(%)

2.  C-T转化效率(%)

3.  目的序列中每个CG的甲基化情况(点状图)

4.  目的序列中每个CG的甲基化比例(%)

 

                                                      点状图

 

柱状图(百分比)

 

 序列比对

 

2,甲基化特异性PCR (methylation-specific PCRMSP)

        甲基化特异性PCR(Methylmion Specific PCR,MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法.

MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧***都被转化为尿嘧***,而

甲基化的胞嘧***则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,最后

通过琼脂糖凝胶电泳分析,确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。

 

 

3,QMSP分析

            QMSP采用荧光定量的方法,可确切定量出甲基化的比例。详情请电联我们的技术服务人员。

 

 4,服务要求

 

1.  如果您需要进行此项服务,请电话联系我们公司或发送E-mail给我们。
2.  请寄送足量的并且保证纯度的基因组DNA(浓度在500 ng/μl以上,体积在 20 μl以上)。
3.  如果提供的材料为细胞或组织,DNA的提取费用另收。 同时应保证材料新鲜,动物细胞

数为106以   上,动物组织为100 mg以上。

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