使用美国AB公司的9700 PCR System为主的多种PCR装置。

  一，原理与应用

甲基化是在DNA甲基转移酶（DNA Methyltransferase, DNMT）催化作用下, 利用

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基，在CpG二核苷酸中胞嘧

啶嘧啶环的五号碳原子上加上甲基的共价修饰过程。DNA甲基化修饰现象广泛存在于

多种有机体中，是最早发现的修饰途径之一，是表观遗传学(Epigenetics)的重要组

成部分。大量研究表明，DNA甲基化不改变DNA的一级结构，但是能引起染色质结构、

DNA 构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而在基因的表达及

其调控、DNA的复制、细胞的生长发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病(如发

育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等)发生过程中发挥重要作用。

    DNA的甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶和少量的N⁶- 甲基腺嘌呤及7-甲基鸟嘌呤。

在高等生物中，5-甲基胞嘧啶多发于CpG二核苷酸序列中，基因组中60%-90%的

CpG是甲基化的。在甲基转移酶(DNMT)的催化作用下，利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)

提供的甲基，使CpG二核苷酸序列中的胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶。由于甲基化胞嘧

啶极易在进化中丢失，高等真核生物中CpG序列远远低于其理论值，但在基因组的某

些区域中，通常是基因的启动子和第一外显子区，CpG序列密度很高，可以达均值

的5倍以上，成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区，形成所谓的CpG岛。哺乳类基因组中约

存在4万个CpG岛，大多位于转录单元的5’区。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普

遍现象，而启动子CpG 岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种

机制。因此，基因启动子甲基化检测在临床诊断、药物敏感性检测等方面具有很高的

应用价值。

二， 服务项目

三， 检测方法

     亚硫酸盐修饰克隆测序法，巢式PCR法，荧光定量PCR法

四， Real Time PCR装置

    使用美国ABI公司的9700 PCR仪和Step-one PLUS System为主的PCR装置。

 五， 服务项目说明 

1， 亚硫酸盐测序法 (bisulfite sequencing PCR, BSP)

        先抽提基因组DNA，再进行亚硫酸盐修饰，甲基化PCR后装克隆，通过最后对PCR产

物进行克隆测序，可以得到目的片段中每个CG位点的甲基化情况，这种方法更加准确，所以

目前BSP法受到更多研究者的青睐！

最后通过对测序结果分析, 可以得到如下数据:

1.  测序序列与目的序列的相似度（%）

2.  C-T转化效率（%）

3.  目的序列中每个CG的甲基化情况（点状图）

4.  目的序列中每个CG的甲基化比例（%）

                                                      点状图

柱状图（百分比）

 序列比对

2，甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR，MSP)

        甲基化特异性PCR(Methylmion Specific PCR，MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法．

MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为尿嘧啶，而

甲基化的胞嘧啶则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增，最后

通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。

3，QMSP分析

            QMSP采用荧光定量的方法，可确切定量出甲基化的比例。详情请电联我们的技术服务人员。

 4，服务要求

1.  如果您需要进行此项服务,请电话联系我们公司或发送E-mail给我们。
2.  请寄送足量的并且保证纯度的基因组DNA(浓度在500 ng/μl以上，体积在 20 μl以上)。
3.  如果提供的材料为细胞或组织，DNA的提取费用另收。 同时应保证材料新鲜，动物细胞

数为10⁶以   上，动物组织为100 mg以上。