RNA干扰慢病毒构建与包装上海生博生物医药科技有限公司

技术服务信息

服务名称:RNA干扰慢病毒构建与包装
服务类别:分子生物学服务 - RNAi全套技术服务
价格:询价
允许参观:不允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2014/5/28 13:58:00
浏览人数:6285
诚信指数:249点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海生博生物医药科技有限公司
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电话:
021-50793722
传真:
联系人:
余 虹
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

   基因治疗是向靶细胞或组织中引入外源基因DNA或RNA片段,上调治疗基因的表达水平或者关闭/抑制异常表达的基因,从而达到治疗的目的。基因治疗成功的关键是选择合适的载体系统,理想的基因治疗载体应具备:靶向特异性;高度稳定、易制备、可浓缩和纯化;无毒性;有利于基因高效转移和长期表达;容量大,易人工合成,缺乏自动复制载体自身的能力。由于病毒基因组结构简单、分子背景比较清楚、易于改造和操作、感染效率高、有较高靶细胞特异性,因此,病毒类基因治疗载体已经从基础研究走向临床医学应用领域,得到了广泛的应用和发展。生博主要提供以慢病毒、腺病毒为主的应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。  

   

      慢病毒(Lentivirus, LV)属于逆转录病毒科,为RNA病毒。经过改造的慢病毒作为外源基因载体,具有其独特的特点和优势。慢病毒载体作为一种特殊的逆转录病毒载体,具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为当前基因治疗载体研究的热点。

慢病毒载体有下列优点:
(1)完美的转染效率:可非常高效地把基因转染到活体模式生物和几乎所有的哺乳动物细胞中,包括分裂和不分裂的细胞。不分裂细胞处于不活跃或者停止生长的状态,非常难转染,例如神经元细胞、原代细胞、干细胞等,针对这类细胞慢病毒载体的转染效率接近100。
(2)稳定长效的表达:载体带有可进行高效率的包装、转染并稳定整合进靶细胞的基因组中的序列元件,目的基因参与细胞的基因重组,形成稳定遗传物质,使得目的基因在细胞中可稳定长期表达。
(3)高安全性,低免疫原性:病毒载体自身灭活,无病毒的复制。上海生博提供的慢病毒表达载体是自身复制灭活的,由于细胞不带有病毒外壳基因,转染后的细胞并不能产生病毒粒子。此外整合进基因组后导致5’-LTR启动子失活,阻止了慢病毒的复制。
(4)可调控表达:可控表达一直是载体研究的一个重要方向,经过特定的元件修饰的慢病毒表达载体,可实现只有在特定的外源或内源物质的作用下才能产生表达,从而调控目的基因的定时、定量表达。

 

生博提供:
      重组慢/腺病毒载体构建服务,包括插入目的基因使其过表达,或者插入shRNA片断达到目的基因RNAi的效果;同时可以根据客户的需要,可在重组慢/腺病毒载体中加入各种报告基因或标签;并可构建可调控表达的重组腺病毒载体。重组慢/腺病毒扩增及纯化,超大量及超高滴度的扩增及纯化病毒滴度高,纯化后可以达到2×10 10- 1×10 12pfu/ml(腺病毒),2×108 - 2×109   pfu/ml(慢病毒)体积在1-2ml左右,可以满足细胞水平研究所需病毒量和满足瘤内注射需要量不同规格病毒扩增。

 

服务流程图

 

[NextPage]

实验流程图

 

实验结果

      构建成功并沉默效率最高的质粒载体及qPCR、Western Blot检测结果;病毒包装成功后,通过qPCR或 Western Blot鉴定结果,根据客户需求量提供相应量的病毒,并对扩增、纯化的病毒同样进行qPCR或Western Blot鉴定,同时检测滴度。并给客户提供q-PCR结果、Western Blot结果及滴度结果。

 

报价与周期

 

 

参考文献

 

[1] Umana P , Gerdes CA , Stone D , et al . Efficient FLPe recombinase enables scalable production of helper - dependent adenoviral vectors with negligible helper - virus contamination. Nat Biotechnol ,2001 ,19(6) :582 - 585.
[2] Cheshenko N , Krougliak N , Eisensmith RC , et al . A novel systemfor the production of fully deleted adenovirus vectors that does not require helper adenovirus[J ] . Gene Ther ,2001 ,8(11) :846 - 854.
[3] Sakhuja K, Reddy PS , Ganesh S , et al . Optimization of the generation and propagation of gutless adenoviral vectors [J ] . Hum Gene Ther,2003 ,14(3) :243 - 254.
[4] McVey D, Zuber M, Brough DE, Kovesdi I. 2003. Adenovirus vector library: an approach to the discovery of gene and protein function. The Journal of General Virology. 84(13). 3417~3422.
[5] Ginsberg HS. 1999. The life and times of adenoviruses. Advances in Virus Research. 54. 1~13.
[6] Christoph Volpers. Stefan Kochanek. Adenoviral vectors for gene transfer and therapy. The Journal of Gene Medicine. 2004.6. S164~S171.
[7] Almeida R, Allshire RC. RNA silencing and genome regulation [J]. Trends Cell Biol, 2005, 15:251-258.


 

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