核体系酵母双杂文库上海欧易生物医学科技有限公司

技术服务详细描述

核体系酵母双杂文库

酵母双杂交（Yeast two hybrid）技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用，已被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域，已成为分子生物学研究领域的重要实验手段。经过不断的完善和发展，不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用，更重要的是还可发现与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

欧易生物结合多年的文库构建经验，推出两套酵母双杂交文库构建体系：一是Clontech体系，在现有酵母双杂交文库构建流程（Clontech专利的BD MatchmakerTM library）基础之上加入独特步骤，使文库中高丰度表达基因明显降低，从而使文库丰度均一提高筛选阳性率；二是Invitrogen体系，采用Gateway位点特异性重组技术（Invitrogen专利的Cloneminer cDNA library construction kit）构建文库。

应用：

检测细胞核内发生互作的蛋白质，基于转录因子的转录激活域AD与DNA结合域BD分别构建融合基因，通过激活报告基因表达，探测蛋白互作。部分物种：水稻 拟南芥 油菜 小麦 烟草 棉花 银杏 土豆 西瓜等

A、Clontech体系

欧易特色

● 改进的分级分离方法使文库的平均片段长度更长

● 均一化可有效降低高丰度基因的含量，从而提高筛选阳性率

● 三框型接头可保证蛋白正常表达

● 同源重组一步完成

● 文库可用于双杂、单杂、三杂

● 如客户转化酵母，欧易可提供100管酵母甘油菌工作液及3-5管母液

项目流程

RNA抽提及质检---文库构建（均一化可选）

B、Invitrogen体系

欧易特色

● mRNA反转录成cDNA构建文库，不经过PCR可避免冗余现象，保证文库质量

● 采用Gateway技术进行建库，欧易提供的初级文库可当做普通cDNA文库使用

● 三框型接头可保证蛋白正确表达

● 欧易提供的次级文库质粒既可用于共转筛库又可用于mating筛库

● 如次级文库用完，可用初级文库与AD载体重组以获得次级文库

● 文库可用于双杂、单杂、三杂

● 如客户转化酵母，欧易可提供100管酵母甘油菌工作液及3-5管母液

项目流程

RNA抽提及质检---分离mRNA---构建初级---文库质粒---构建次级---文库质粒

提供内容

● 实验报告：详细实验流程、各阶段电泳图、工作液细胞密度、文库库容量、插入片段长度鉴定图等

● 初级文库质粒及菌液

● 次级文库质粒及菌液

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