DNA甲基化检测技术服务—HRM法
 
DNA甲基化是一种表观遗传修饰，它是由DNA甲基转移酶（DNA methyl-transferase, DNMT）催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式，能在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。一般说来，DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。
    HRM法原理：用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为5-甲基胞嘧啶（mC）（即尿嘧啶（U））而甲基化的胞嘧啶则不变。在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化，用亚硫酸氢盐处理后，则未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，样品中的GC含量发生改变，从而导致熔解温度的变化（图1）。


                                         图1　不同甲基化程度的样品（0%到100%）的HRM熔解曲线
 
服务内容
1. 基因组DNA的Bisulfite转化。
2. DNA甲基化检测——基于HRM（High Resolution Melting,HRM）法。
3.本公司所用试剂全为进口试剂，实验全程质量保证。

样品要求
　　　细胞（≥10⁶ 个）、组织（≥300mg）、血液（≥1ml）、血清（≥1.5ml）等样品材料，基因组DNA（体积≥50μl，浓度≥50 ng/μl）。
 
终产品
·Bisulfite处理的基因组DNA；
·扩增曲线、熔解曲线；
·实验报告。

服务周期
1~2周

服务说明
关于引物    在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中，引物是实验成功的关键因素，且因检测的目的基因片段的不同，合适引物的存在与否有较大的不确定性，请尽量采用经过验证的引物，如需DNA甲基化检测引物设计服务，价格另议。