北京华夏远洋科技有限公司
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腺病毒表达服务
质量保证：可提供1E8 - 1E9 pfu/ml原液或1E10 - 1E11 pfu/ml浓缩液
可获得复制缺陷型（E1和E3缺失，为第二代病毒）的腺病毒，生物安全性更高；获得的重组病毒在培养基中非常稳定
原理
腺病毒系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中高效瞬时过表达的可靠的基因递送平台。对于难转染的细胞，如原代或非分裂细胞，采用病毒递送外源基因的方式是非常有效的选择。我们采用293A腺病毒包装细胞系（含有腺病毒包装所必需的E1基因序列，是专为生产腺病毒和进行滴度测定而建立的），用于高滴度的复制缺陷型（E1和E3缺失）腺病毒的生产，以进行外源基因的表达。腺病毒感染几乎所有的细胞类型，除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤细胞。腺病毒是研究原代非增殖细胞基因表达的最佳系统，它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比；不整合到染色体中，无插入致突变性。能有效进行增殖，滴度高：腺病毒系统可产生1E8 pfu/ml原液，浓缩后可达1E10 - 1E11 pfu/ml，这一特点使它非常适用于基因治疗。
服务流程
1) 客户提供：含有目标基因的质粒（提供测序图谱）或所要表达的目的基因的名称，序列；所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化；若需要检测外源基因的表达，如需要请提供相应的抗体
2) 构建含有外源基因的腺病毒表达克隆，采用PacI消化纯化质粒使ITRs裸露出来
3) 将腺病毒表达克隆转染293A细胞，收获细胞以制备病毒粗提液
4) 将病毒粗提液感染293A细胞以扩增病毒，确定病毒滴度
5) 将病毒上清加入靶细胞中
6) 分析重组目的蛋白的表达
7) 我们提供：提供重组后的腺病毒载体质粒，并附上对目的基因的PCR鉴定结果；提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的腺病毒储存液