克隆形成实验和元生物技术(上海)股份有限公司

技术服务信息

服务名称:克隆形成实验
服务类别:细胞生物学服务 - 其它
价格:3000元
允许参观:协商决定
所在区域:上海.上海
更新时间:2018/3/6 10:48:00
浏览人数:6077
诚信指数:891点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
点此求购 我要咨询
生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

供应商联系卡

和元生物技术(上海)股份有限公司
地址:
上海市浦东新区国际医学园区紫萍路908弄19号楼
邮编:
201321
电话:
13501676670
传真:
021-55230588
联系人:
姜女士
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:
扫一扫,关注我们

技术服务详细描述

克隆形成实验

摘要:在A549细胞中过表达human Oct-4基因,通过对Oct-4基因过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组克隆形成数量的统计学分析,研究Oct-4对A549细胞群体依赖性和增殖能力的影响。实验结果显示Oct-4基因的表达促进A549细胞的克隆形成能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。
关键词:Oct-4,克隆形成,A549

一、 实验原理
单个细胞在体外增殖6代以上(时间约1周以上),其后代所形成的细胞群体,称为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3 - 1.0mm之间。细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数, 但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖并形成克隆。只有同时具有贴壁和增殖活力的细胞才会形成克隆。克隆形成率反映细胞的独立生存能力的强弱,用于评价细胞群体依赖性和增殖能力。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强; 二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。克隆形成率与接种密度有一定关系,做克隆形成率测定时,接种细胞一定要分散成单细胞悬液,直接接种在培养皿中,持续一周以上,随时检查,到细胞形成克隆时终止培养。

二、 实验目的
使用Oct-4-EGFP质粒瞬时转染A549细胞。通过观察Oct-4过表达的A549细胞的克隆形成率研究Oct-4基因对细胞增殖的影响。

三、 实验步骤
实验共分以下5个主要步骤:
1. 质粒转染细胞:
准备A549细胞,转染前一天按照60-70%密度铺在6孔板中。16h后,按照转染试剂说明书转染细胞(4μg质粒,10μl和元生物转染试剂)。
2. 制备单细胞混悬液:
转染24h后,将细胞消化,制成细胞悬液,血球计数板计数。
3. 细胞均匀接种于细胞培养平板:
铺板,6孔板每孔铺200 -1000个细胞,每组细胞各铺3个复孔。
4. 细胞培养2到3周:
每隔3天换一次新鲜培养基。
5. 观察克隆,染色,计算克隆形成率:
10~14天后,染色液染色。数码相机拍照或者扫描仪扫描,计算克隆形成率。

四、 实验结果

                                                  
                                                                     图1. 过表达Oct-4对A549细胞克隆形成的影响
     从左开始依次为A549空细胞组,对照组(过表达EGFP),实验组(过表达Oct-4-EGFP),每组实验均重复3次

                                                                             

                                                          图2. 过表达Oct-4对A549细胞克隆形成影响的统计分析
                                                                            **表示p<0.01;***表示p<0.001


结论:从实验结果以及克隆数的统计分析可以发现,A549细胞在过表达Oct-4-EGFP后,克隆形成能力均高于空细胞组(p<0.01)以及对照组(p<0.001)。

五、 参考文献
1. Hashimura T, Yoshida O. Soft agar colony formation of mouse epidermal cells during the early phase of two-stage chemically induced carcinogenesis. Jpn J Cancer Res. 1985 May;76(5):321-3.
2. MACPHERSON I, MONTAGNIER L. AGAR SUSPENSION CULTURE FOR THE SELECTIVE ASSAY OF CELLS TRANSFORMED BY POLYOMA VIRUS. Virology. 1964 Jun;23:291-4.
3. Lieber MM. Technical problems with soft agar colony formation assays for in vitro chemotherapy sensitivity testing of human solid tumors: Mayo Clinic experience. Recent Results Cancer Res. 1984;94:51-5.
4. Wang YH, Liu S, Zhang G, Zhou CQ, Zhu HX, Zhou XB, Quan LP, Bai JF, Xu NZ. Knockdown of c-Myc expression by RNAi inhibits MCF-7 breast tumor cells growth in vitro and in vivo. Breast Cancer Res. 2005;7(2):R220-8.
5. Barber PR, Vojnovic B, Kelly J, Mayes CR, Boulton P, Woodcock M, Joiner MC. Automated counting of mammalian cell colonies. Phys Med Biol. 2001 Jan;46(1):63-76.
6. Bernard R, Kanduser M, Pernus F. Model-based automated detection of mammalian cell colonies. Phys Med Biol. 2001 Nov;46(11):3061-72.
7. Hickson I, Zhao Y, Richardson CJ, Green SJ, Martin NM, Orr AI, Reaper PM, Jackson SP, Curtin NJ, Smith GC. Identification and characterization of a novel and specific inhibitor of the ataxia-telangiectasia mutated kinase ATM. Cancer Res. 2004 Dec 15;64(24):9152-9.
8. Brock MV, Kim MP, Hooker CM, Alberg AJ, Jordan MM, Roig CM, Xu L, Yang SC. Pulmonary resection in octogenarians with stage I nonsmall cell lung cancer: a 22-year experience. Ann Thorac Surg. 2004 Jan;77(1):271-7.
9. Tsukamoto T, Alley MC, Kurth KH, Lieber MM. Growth of human renal carcinoma in soft agar colony formation assays measured by computer-assisted volume analysis.  1986 Feb;135(2):392-6.

 

 

生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

查看克隆形成实验 产品的用户还对以下产品感兴趣

  MTT/CCK8细胞增殖检测   [供应商:厦门生命互联科技有限公司]
  MTT、XTT、WST-1、CCK-8测细胞增殖毒性检测服务   [供应商:百奥迈科生物技术有限公司]
  慢病毒包装与感染   [供应商:厦门生命互联科技有限公司]
  细胞转染与细胞系的构建   [供应商:厦门生命互联科技有限公司]
  干细胞原代提取/培养扩增/诱导分化/检测鉴定服务   [供应商:赛业(广州)生物科技有限公司]
  细胞生物学相关服务   [供应商:中美合资博慧斯生物医药科技有限公司]
  干细胞诱导分化服务   [供应商:赛业(广州)生物科技有限公司]
  干细胞常规检测服务   [供应商:赛业(广州)生物科技有限公司]
  四甲基偶氮唑盐比色法(mtt方法),   [供应商:上海拜力生物科技有限公司]
  血清质量检测及细胞污染相关服务   [供应商:中美合资博慧斯生物医药科技有限公司]

ADVERTISEMENT

找不到您所需的产品,发布求购试试?

标题:*
描述:
姓名:*
Email:*
单位:*
电话:*
地址:*
邮编:
资料: 需要 不需要
报价: 需要 不需要