在2019年出版的《Target Identification and Validation in Drug Discovery: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology》一书中包含了题为“Tangential Flow Filtration with or Without Subsequent Bind-Elute Size Exclusion Chromatography for Purification of Extracellular Vesicles”的章节。该章节详细介绍了使用切向流过滤进行胞外囊泡，特别是外泌体，的纯化步骤。本文为原文内容简介，详细内容，请参考原文。
简介
近几年来，随着一系列突破性文章的发表，胞外囊泡（EV）越来越受到关注。大部分体内细胞都会分泌EV，且在所有的体液中都可以检测到。EV可分为3个主要的亚群：来自内溶酶体途径的外泌体，直径约30-150nm；细胞质膜直接出芽形成的微泡，直径100-1000nm；以及源自凋亡细胞的凋亡小体，其非均质性较高，粒径范围500-5000nm。本文中的EV指外泌体和微泡。EV包含生物活性脂质、蛋白质和不同的RNA物质（如miRNA、mRNA和rRNA）。由于其较高的内容物异质性，其可以多效性的方式影响细胞，如直接与细胞表面受体相互作用、递送生物活性RNA和蛋白质及随后通过不同的机制，影响受体细胞的表型。
但是，治疗性和生物标记物EV研究都受到了缺乏严格纯化方案的限制。该领域的金标准是超速离心（UC），包括转速逐步提高的多个连续离心步骤，最后一步为110,00-120,000g UC。但是，针对这种方式有诸多的顾虑，包括产量高度依赖于操作员的水平、可能导致囊泡破碎和聚集、可放大性较低且可获得的纯度水平有限。因此，研究人员又开发了不同的纯化方法，包括微流、基于沉淀的技术、体积排阻层析（SEC）以及基于免疫捕获的技术。本文中，研究人员开发一种基于切向流过滤的可放大且稳健的纯化方法（TFF），其后续可选择性进行结合-洗脱的体积排阻层析（TFF/BE-SEC）。TFF/BE-SEC针对细胞培养上清液进行优化，程序可获得50-80%的高EV产量。该方法高度适合处理大体积的料液，获得可供后续临床前以及潜在临床使用的高纯度样品。
详细内容，请点击：使用切向流过滤进行胞外囊泡（外泌体）的纯化
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