掌握以下9点轻松分离并培养表皮角质细胞-技术前沿-资讯-生物在线

掌握以下9点轻松分离并培养表皮角质细胞

作者:上海启达生物科技有限公司 2024-04-12T00:00 (访问量:8800)

提前准备好KGM培养基(首次提取为了防止角化细胞分化,建议加2.5%的马血清)

培养基是这样的,套装无血清组分不含动物来源蛋白,500ml一套,使用简单方便。

提前预冷将冲洗组织的缓冲液配制好,我们的建议是50%MEM+50%HBSS+2%PSN配好后放4°冰箱里保存。

眼科剪,眼科镊子, 冰浴提前消毒准备好,0.25%EDTA胰酶准备好

 

好了,啰嗦了这么多,现在开始了。先来看看我们的提取的细胞图片吧:

使用KGM角化细胞培养基(启达生物,货号:P8001)提取的人皮肤角质细胞7天的细胞生长图

 

怎么样看完图片心动了吗?

那么我们就开始提取的步骤吧!

表皮角质细胞的分离步骤主要包括以下几步:

1.取厚1.5mm的皮片,(不超过12个小时为佳)用4℃MEM和HBSS混合液冲洗获取的皮肤材料2-3次。冰浴的培养皿里操作,第一次冲去血迹,第二次刮去黏附的其他组织,就留下真皮层和表皮层,在冲洗一次后将组织移入新的培养皿中

2. 将皮肤展平,用手术刀切成2-3mm²的小片,放入中性蛋白酶消化液中,4℃下消化15-20h,或37℃下消化2-4h。

3.用无菌针头和眼科镊子分离真皮与表皮。表皮薄而透明,真皮厚且轻微肿胀并且在胰酶的消化下呈凝胶状。

4.将分离出的表皮块用0.25%胰蛋白酶,在37℃下振荡消化10-30min后,直到表皮组织成絮状后,加入含10%胎牛血清的培养基终止消化。

完成以上步骤后,你已经看到成功分离出表皮角质细胞的曙光了但是一定要注意,整个过程需要精细的操作和严格的无菌环境,以确保细胞的完整性和活性。

5.用吸管轻轻吹打表皮组织,使细胞从组织块上脱落下来,然后使用100um细胞滤网过滤并将细胞悬液转移到离心管中。

6.在离心管中加入适量KGM角化细胞培养基,然后1000rpm离心5-7分钟,以去除消化液和杂质。

7.弃去上清液,加入新的KGM培养基,轻轻吹打细胞,使其均匀悬浮。48小时后观察细胞贴壁情况(第一次铺板的时候建议加2.5%HS)

8.将细胞悬液接种到适当的培养器皿(如培养皿、培养瓶或培养板)中,加入足量的培养基,并放入细胞培养箱中进行培养。

9.在细胞培养过程中,需要定期更换培养基,以保持细胞的生长环境。同时,也需要观察细胞的生长情况,并根据需要调整细胞密度和传代。

 

以上步骤完成后,你就可以得到分离纯化的表皮角质细胞,用于后续的实验研究。请注意,实验过程中需要严格遵守无菌操作规范,以避免细胞污染和实验失败。同时,也需要根据实验需要选择合适的培养基和条件,以确保细胞的正常生长和分化,比如角化细胞就使用我们的KGM角化细胞培养基,内皮细胞就使用我们的ECGM内皮细胞培养基.....

在细胞培养过程中,我们需要定期观察细胞的生长状态(一般建议两天观察一次或者一天一次)。健康的角质细胞应该呈现出贴壁生长、形态规则、细胞边界清晰等特征。如果发现细胞出现生长缓慢、形态异常、污染等情况,需要及时采取措施,如更换新的培养基、调整培养条件、传代或重新分离细胞.

 

怎么样你学会了吗?

上海启达生物科技有限公司 商家主页

地 址: The third build,No.101 West Youyi road ,BaoShan area ,ShangHai,China

联系人: 温女士

电 话: 13012892256

传 真: 021-56800119

Email:info@ldraft.com

相关咨询

论怎么提取黑素细胞的小秘密 (2024-05-10T00:00 浏览数:4324)

难解难分的周细胞怎么分离,一个protocol轻松解决 (2024-04-28T00:00 浏览数:6484)

阐述细胞的“饥饿游戏”——细胞吞噬实验的操作 (2024-04-19T00:00 浏览数:9069)

掌握以下9点轻松分离并培养表皮角质细胞 (2024-04-12T00:00 浏览数:8800)

细胞怎么给药? (2024-04-01T00:00 浏览数:11612)

悬浮细胞的MTT实验操作步骤及注意事项 (2024-03-22T00:00 浏览数:15388)

细胞主要的信息传导通路和查询的网站 (2024-03-06T00:00 浏览数:13266)

肿瘤生物学中的癌症干细胞研究意义 (2024-03-01T00:00 浏览数:16972)

细胞培养无小事 (2024-02-23T00:00 浏览数:10032)

IPS细胞诱导分化神经细胞操作的protocol (2024-01-19T00:00 浏览数:21431)

ADVERTISEMENT